English
Vật liệu và phương pháp
3.1. Nuôi cấy bình lắc
Tiền nuôi cấy tế bào huyền phù MDCK.SUS2 được nuôi cấy trong shaker bình (bình Erlenmeyer 125 mL polycarbonate, # 431143, Corning®, thành phố New York, NY, Hoa Kỳ) với thể tích làm việc 50 mL (wv) , trong tủ ấm Multitron Pro (Infors HT, Bottmingen, Thụy Sĩ) ở 37 ° C và 5% CO2 trong môi trường với tần số lắc 180 vòng / phút. Tế bào được phân chia 3–4 ngày một lần với mật độ gieo hạt 0,5–0,8 × 106 tế bào / mL.
IAV A / Puerto Rico / 8/34 (H1N1) virus hạt giống đã được sử dụng để lây nhiễm, được tạo ra trong các ô MDCK kết dính (ECACC # 84121903). Virus hạt giống có hiệu giá 1,1 × 109 TCID50 / mL.
Tế bào được nuôi cấy trong môi trường không chứa thành phần động vật và protein đã được xác định về mặt hóa học, Smif8 (Smif8 PGD 2 ×, bổ sung 5 mM glutamine, và 8 mM pyruvate), được phát triển đặc biệt để nuôi cấy tế bào MDCK huyền phù [95].
Thí nghiệm tăng trưởng và lây nhiễm để xác nhận mô hình được thực hiện bằng cách sử dụng bình lắc 500 mL (# 4113-0500, Nalgene ™, Thermo Scientific, Waltham, MA, Mỹ) với thể tích nuôi cấy ban đầu là 200 mL ở tốc độ 150 vòng / phút. Hai lần nuôi cấy đã được thực hiện, một lần nhiễm trùng mô phỏng (Nuôi cấy 1), trong đó các tế bào phát triển trong khoảng 200 giờ và một lần lây nhiễm (Nuôi cấy 2), trong đó các tế bào bị nhiễm IAV vào khoảng 49 giờ sau khi cấy. Để đạt được sự lây nhiễm đồng bộ của quần thể tế bào, một moi = 10 đã được sử dụng. Do nồng độ tế bào tương đối thấp tại thời điểm lây nhiễm (2,1 × 106 tế bào / mL) và moi cao được sử dụng, không cần thiết phải thay thế vừa hoặc bổ sung trypsin (để kích hoạt vi rút). Trong cả hai lần nuôi cấy, nước Milli-Q vô trùng đã được thêm vào trước khi lấy mẫu để bù lại lượng nước bốc hơi (1–2 mL / ngày) vì thí nghiệm được thực hiện trong tủ ấm không ngậm nước.
Nguồn từ: https: / /www.mdpi.com/2218-1989/12/3/239/htm
The FAI climbed 5.9 percent year-on-year in the first 11 months of 2018, quickening from the 5.7-percent growth in Jan-Oct, the National Bureau of Statistics (NBS) said Friday in an online statement.
The key indicator of investment, dubbed a major growth driver, hit the bottom in August and has since started to rebound steadily.
In the face of emerging economic challenges home and abroad, China has stepped up efforts to stabilize investment, in particular rolling out measures to motivate private investors and channel funds into infrastructure.
Friday's data showed private investment, accounting for more than 60 percent of the total FAI, expanded by a brisk 8.7 percent.
NBS spokesperson Mao Shengyong said funds into weak economic links registered rapid increases as investment in environmental protection and agriculture jumped 42 percent and 12.5 percent respectively, much faster than the average.
In breakdown, investment in high-tech and equipment manufacturing remained vigorous with 16.1-percent and 11.6-percent increases respectively in the first 11 months. Infrastructure investment gained 3.7 percent, staying flat. Investment in property development rose 9.7 percent, also unchanged.