English
Лізогенні бактерії відносяться до бактерій, які мають профаги, інтегровані в їхні хромосоми, і можуть нормально рости та розмножуватися без лізиру. М’які бактеріофаги широко використовуються в області трансдукції, векторів генної інженерії та молекулярної біології. колба для культури клітин можна використовувати для перевірки лізогенності бактерій. Конкретний метод роботи такий:
1. Культура лізогенних бактерій: інокулюють E. coli 225 (λ), активовану нахилом LB, у колбу для культури клітин ємністю 250 мл, що містить 20 мл розчину культури LB, культуру зі струшуванням при 30°C протягом 16 годин, а потім візьміть з неї 2 мл бактеріальної суспензії та з'єднати його з іншою. У колбі Ерленмейера об'ємом 250 мл, що містить 20 мл бульйону LB, культуру зі струшуванням при 37°C протягом 2 год до логарифмічної фази.
2. Виключити вільний фаг: якщо штам, що підлягає тестуванню, є Bacillus, з нього можна зробити суспензію спор, а потім обробити при 80°C протягом 10 хвилин, щоб знищити фаг, який може адсорбуватися і вільно адсорбуватися на поверхні лізогенних бактерій; якщо штам, що підлягає тестуванню, не є бактерією, використовуйте антисироватку, приготовлену фагом або 0,2% розчином цитрату натрію, щоб промити клітини лізогену log-фази для видалення адсорбованого на поверхні та вільного фага. Після центрифугування при 4000 об/хв протягом 10 хвилин до супернатанту можна додати чутливі індикаторні бактерії для визначення двошарових планшетів, які використовуються для перевірки вільного фага зразка та фага, який адсорбує лізогенні бактерії. Фаг після центрифугування Клітини індукують.
3. Індукція лізогенних бактерій: бактерії, зібрані після центрифугування, двічі промивають стерильним фізіологічним розчином і доводять до кінцевої концентрації 1011 клітин/мл за допомогою звичайного фізіологічного розчину або 100 ммоль/л буфера Tris-HCL (pH7,0). Для бактеріальної суспензії додайте 5 мл бактеріальної суспензії на кожну чашку, опромінюйте УФ-лампою потужністю 30 Вт на відстані 30 см протягом 30 секунд, негайно додайте 5 мл розчину культури LB подвійної концентрації, добре перемішайте та інкубуйте в темряві при 37°C протягом 2 год.
4. Перевірка лізогенних штамів: Використовуйте метод двошарового агару, додайте кілька крапель хлороформу до вищезгаданого індукованого лізату та належним чином розведіть методом 10-кратного розведення. Після вибору трьох розведень для розведення візьміть 0,3 мл для кожного розведення. Добре перемішайте з 0,2 мл суспензії бактерій E.coli 226, чутливої до логарифмічної фази, потім додайте розплавлене та охолоджене до 45°C середовище LB, охолоджене до 45°C, негайно перемішайте, а потім вилийте його на пластину з твердим середовищем LB. Після застигання 37 Інкубувати при ℃ протягом 6 годин і спостерігати. Якщо на культивованій чашці з’являється велика кількість бляшок, це свідчить про те, що досліджуваний штам є лізогеном.
Щоб перевірити, чи бактерії мають лізогенність, виконайте наведені вище дії. Звертайте увагу на стерильність процесу під час роботи, щоб уникнути неправильної експлуатації, що впливає на результати тесту.
The FAI climbed 5.9 percent year-on-year in the first 11 months of 2018, quickening from the 5.7-percent growth in Jan-Oct, the National Bureau of Statistics (NBS) said Friday in an online statement.
The key indicator of investment, dubbed a major growth driver, hit the bottom in August and has since started to rebound steadily.
In the face of emerging economic challenges home and abroad, China has stepped up efforts to stabilize investment, in particular rolling out measures to motivate private investors and channel funds into infrastructure.
Friday's data showed private investment, accounting for more than 60 percent of the total FAI, expanded by a brisk 8.7 percent.
NBS spokesperson Mao Shengyong said funds into weak economic links registered rapid increases as investment in environmental protection and agriculture jumped 42 percent and 12.5 percent respectively, much faster than the average.
In breakdown, investment in high-tech and equipment manufacturing remained vigorous with 16.1-percent and 11.6-percent increases respectively in the first 11 months. Infrastructure investment gained 3.7 percent, staying flat. Investment in property development rose 9.7 percent, also unchanged.