English
Лізис клітин є важливим експериментальним методом зміни проникності та активності клітин. Це означає, що після того, як клітина заражена вірусом, вірус використовує поживні речовини в клітині-хазяїні для синтезу власного потомства, а потім нащадок вірусу руйнує клітину-хазяїна і вивільняється з клітин. У експериментах з лізису клітин колби для культури клітин є звичайним витратним матеріалом. Етапи лізису клітин такі:
1. Вилийте культуральне середовище і закріпіть пляшку для культури клітин догори дном на абсорбуючому папері, щоб абсорбуючий папір поглинув культуральне середовище (або поставте пляшку вертикально на деякий час, щоб дозволити залишковому культуральному середовищу стекти на дно пляшки а потім за допомогою піпетки відсмоктати його).
2. Додайте 3 мл попередньо охолодженого 4℃ PBS (0,01M pH7,2～7,3) до кожної пляшки клітин. Розкладіть клітини пласко і обережно струшуйте протягом 1 хв, щоб промити клітини, а потім видаліть промивний розчин. Повторіть вищезазначену операцію двічі, промиваючи клітини тричі, щоб змити культуральну рідину. Викиньте PBS і помістіть культуральну колбу на лід.
3. Додайте 10 мкл PMSF (100 мМ) до 1 мл буфера для лізису, добре струсіть і помістіть на лід. (Перед змішуванням з розчином для лізису PMSF необхідно струшувати до повного зникнення кристалів.)
4. Додайте 400 мкл буфера для лізису, що містить PMSF, до кожної колби клітин і лізуйте на льоду протягом 30 хвилин. Для повного лізу клітин колбу необхідно часто струшувати.
5. Після лізису за допомогою чистого скребка зіскрібіть клітини з одного боку культуральної колби (дія має бути швидкою), а потім за допомогою пістолета перемістіть залишки клітин і лізат у центрифужну пробірку об’ємом 1,5 мл. (Всю операцію слід виконувати на льоду, наскільки це можливо.)
6. Центрифугувати при 12000 об/хв при 4°С протягом 5 хв. (Заздалегідь увімкніть центрифугу для попереднього охолодження)
7. Перенесіть центрифугований супернатант в центрифужну пробірку на 0,5 хв і зберігайте при -20°C
флаби для культивування клітин використовуються не тільки для експериментів з лізисом клітин, але також для середнього масштабу клітинної та тканинної культури в лабораторії, наприклад клітини Vero , клітини HEK 293, клітини CAR-T, клітини CHO, клітини комах тощо
The FAI climbed 5.9 percent year-on-year in the first 11 months of 2018, quickening from the 5.7-percent growth in Jan-Oct, the National Bureau of Statistics (NBS) said Friday in an online statement.
The key indicator of investment, dubbed a major growth driver, hit the bottom in August and has since started to rebound steadily.
In the face of emerging economic challenges home and abroad, China has stepped up efforts to stabilize investment, in particular rolling out measures to motivate private investors and channel funds into infrastructure.
Friday's data showed private investment, accounting for more than 60 percent of the total FAI, expanded by a brisk 8.7 percent.
NBS spokesperson Mao Shengyong said funds into weak economic links registered rapid increases as investment in environmental protection and agriculture jumped 42 percent and 12.5 percent respectively, much faster than the average.
In breakdown, investment in high-tech and equipment manufacturing remained vigorous with 16.1-percent and 11.6-percent increases respectively in the first 11 months. Infrastructure investment gained 3.7 percent, staying flat. Investment in property development rose 9.7 percent, also unchanged.