English
Lizojenik bakteriler, kromozomlarına entegre profajlara sahip olan ve parçalanmadan normal şekilde büyüyebilen ve çoğalabilen bakterileri ifade eder. Hafif bakteriyofajlar, transdüksiyon, genetik mühendisliği vektörleri ve moleküler biyoloji alanlarında yaygın olarak kullanılmaktadır. hücre kültürü şişesi bakterilerin lizojenitesini kontrol etmek için kullanılabilir. Spesifik çalışma yöntemi aşağıdaki gibidir:
1. Lizojenik bakteri kültürü: LB eğimi tarafından aktive edilen E. coli 225'i (λ), 20ml LB kültür solüsyonu içeren 250ml'lik bir hücre kültürü şişesine, kültürü 30°C'de 16 saat çalkalayarak inoküle edin ve ardından bundan 2ml bakteri süspansiyonu alın ve başka birine bağlayın 20 ml LB et suyu içeren 250 ml'lik bir Erlenmeyer şişesinde, 2 saat boyunca 37°C'de çalkalayarak logaritmik faza kadar kültür. Serbest faj hariç: Test edilecek suş Bacillus ise, bir spor süspansiyonu haline getirilebilir ve daha sonra adsorbe edilebilecek ve lizojenik bakterilerin yüzeyinde serbest kalabilecek fajları öldürmek için 80°C'de 10 dakika işlenebilir; test edilecek suş Bacillus değilse, yüzeye adsorbe edilmiş ve serbest fajları uzaklaştırmak için log faz lizojen hücrelerini yıkamak için faj veya %0.2 sodyum sitrat solüsyonu ile hazırlanan antiserum kullanın. 10 dakika boyunca 4000r/dk'da santrifüjlemeden sonra, süpernatan, numunenin serbest fajını ve lizojenik bakterileri adsorbe eden fajı test etmek için kullanılan çift katmanlı plaka tayini için hassas indikatör bakterilerle eklenebilir. Santrifüjden sonra faj Hücreler indüklenir. Lizojenik bakterilerin uyarılması: Santrifüjden sonra toplanan bakteriler steril normal tuzlu su ile iki kez yıkanır ve normal tuzlu su veya 100 mmol/l Tris-HCL tamponu (pH7.0) ile 1011 hücre/ml'lik bir nihai konsantrasyona dönüştürülür Bakteri süspansiyonu için, Her tabağa 5 ml bakteri süspansiyonu, 30 W UV lambası ile 30 cm mesafede 30 saniye ışınlayın, hemen 5 ml çift konsantrasyonlu LB kültür solüsyonu ekleyin, iyice karıştırın ve karanlıkta 37°C'de 2 saat inkübe edin.
4. Lizojenik suşların incelenmesi: Çift katmanlı agar yöntemine göre çalıştırın, yukarıda indüklenen lizata birkaç damla kloroform ekleyin ve 10 kat seyreltme yöntemiyle uygun şekilde seyreltin. Seyreltmenin üç dilüsyonunu seçtikten sonra, her seyreltme için 0.3 ml alın. 0,2 ml logaritmik faza duyarlı E. coli 226 bakteri süspansiyonu ile iyice karıştırın, ardından eritilmiş ve 45°C'ye soğutulmuş LB yarım gövde ortamını ekleyin, hemen karıştırın ve ardından LB katı ortam plakasına dökün. Katılaşmadan sonra 37 °C'de 6 saat inkübe edin ve gözlemleyin. Kültürlenmiş plaka üzerinde çok sayıda plak görünüyorsa, test edilen suşun bir lizojen olduğunu kanıtlar.
Bakterilerin lizojenik olup olmadığını kontrol etmek için yukarıdaki adımları izleyin. Test sonuçlarını etkileyen hatalı işlemden kaçınmak için işlem sırasında işlemin sterilliğine dikkat edin.
4. Inspection of lysogenic strains: Operate according to the double-layer agar method, add a few drops of chloroform to the above induced lysate, and dilute appropriately with the 10-fold dilution method. After selecting the three dilutions of the dilution, take 0.3ml for each dilution. Mix well with 0.2ml of logarithmic phase sensitive E. coli 226 bacteria suspension, then add LB half-body medium that has been melted and cooled to 45°C, mix immediately, and then pour it onto the LB solid medium plate. After solidification, 37 Incubate at ℃ for 6h and observe. If a large number of plaques appear on the cultured plate, it proves that the tested strain is a lysogen.
To check whether the bacteria have lysogenicity, follow the above steps. Pay attention to the sterility of the process during operation to avoid improper operation that affects the test results.
The FAI climbed 5.9 percent year-on-year in the first 11 months of 2018, quickening from the 5.7-percent growth in Jan-Oct, the National Bureau of Statistics (NBS) said Friday in an online statement.
The key indicator of investment, dubbed a major growth driver, hit the bottom in August and has since started to rebound steadily.
In the face of emerging economic challenges home and abroad, China has stepped up efforts to stabilize investment, in particular rolling out measures to motivate private investors and channel funds into infrastructure.
Friday's data showed private investment, accounting for more than 60 percent of the total FAI, expanded by a brisk 8.7 percent.
NBS spokesperson Mao Shengyong said funds into weak economic links registered rapid increases as investment in environmental protection and agriculture jumped 42 percent and 12.5 percent respectively, much faster than the average.
In breakdown, investment in high-tech and equipment manufacturing remained vigorous with 16.1-percent and 11.6-percent increases respectively in the first 11 months. Infrastructure investment gained 3.7 percent, staying flat. Investment in property development rose 9.7 percent, also unchanged.