English
Hücre lizizi, hücre geçirgenliğini ve aktivitesini değiştirmek için önemli bir deneysel yöntemdir. Bu, bir hücreye bir virüs bulaştıktan sonra, virüsün kendi yavrularını sentezlemek için konakçı hücredeki besinleri kullandığı ve ardından virüs yavrularının konak hücreyi yok ettiği ve hücrelerden salındığı anlamına gelir. Hücre parçalama deneylerinde hücre kültürü şişeleri yaygın bir sarf malzemesidir. Hücre lizizi için adımlar aşağıdaki gibidir:
1. Kültür ortamını boşaltın ve hücre kültürü şişesini emici kağıdın kültür ortamını emmesi (veya kalan kültür ortamının şişenin dibine akmasına izin vermek için şişeyi bir süre dik konuma getirmesi için) emici kağıdın üzerine ters çevirin. ve sonra emmek için bir pipet kullanın ).
2. Her hücre şişesine 3 ml 4℃ önceden soğutulmuş PBS (0.01M pH7.2～7.3) ekleyin. Hücreleri düz bir şekilde yatırın ve hücreleri yıkamak için 1 dakika hafifçe sallayın ve ardından yıkama solüsyonunu atın. Kültür sıvısını yıkamak için hücreleri üç kez yıkayarak yukarıdaki işlemi iki kez tekrarlayın. PBS'yi atın ve kültür şişesini buza koyun.
3. 1 ml lizis tamponuna 10ul PMSF (100mM) ekleyin, iyice çalkalayın ve buz üzerine yerleştirin. (PMSF, lizis solüsyonu ile karıştırılmadan önce kristal kalmayana kadar çalkalanmalıdır.)
4. Her bir hücre şişesine PMSF içeren 400ul lizis tamponu ekleyin ve 30 dakika boyunca buz üzerinde parçalayın. Hücreleri tamamen parçalamak için şişe sık sık çalkalanmalıdır.
5. Parçalamadan sonra, kültür şişesinin bir tarafındaki hücreleri sıyırmak için temiz bir kazıyıcı kullanın (eylem hızlı olmalıdır) ve ardından hücre kalıntılarını ve lizatı 1,5 ml'lik bir santrifüj tüpüne taşımak için bir tabanca kullanın. (Bütün işlem mümkün olduğunca buz üzerinde yapılmalıdır.)
6. 12000 rpm'de 4°C'de 5 dakika santrifüjleyin. (Ön soğutma için santrifüjü önceden açın)
7. Santrifüjlenmiş süpernatanı 0,5 dakika bir santrifüj tüpüne aktarın ve -20°C'de saklayın.
Hücre kültürü şişeleri yalnızca hücre liziz deneyleri için değil, aynı zamanda Vero hücreleri gibi laboratuvarda orta ölçekli hücre ve doku kültürü için de kullanılır. , HEK 293 hücreleri, CAR-T hücreleri, CHO hücreleri, böcek hücreleri, vb.
The FAI climbed 5.9 percent year-on-year in the first 11 months of 2018, quickening from the 5.7-percent growth in Jan-Oct, the National Bureau of Statistics (NBS) said Friday in an online statement.
The key indicator of investment, dubbed a major growth driver, hit the bottom in August and has since started to rebound steadily.
In the face of emerging economic challenges home and abroad, China has stepped up efforts to stabilize investment, in particular rolling out measures to motivate private investors and channel funds into infrastructure.
Friday's data showed private investment, accounting for more than 60 percent of the total FAI, expanded by a brisk 8.7 percent.
NBS spokesperson Mao Shengyong said funds into weak economic links registered rapid increases as investment in environmental protection and agriculture jumped 42 percent and 12.5 percent respectively, much faster than the average.
In breakdown, investment in high-tech and equipment manufacturing remained vigorous with 16.1-percent and 11.6-percent increases respectively in the first 11 months. Infrastructure investment gained 3.7 percent, staying flat. Investment in property development rose 9.7 percent, also unchanged.