วิธีใช้ขวดเพาะเลี้ยงเซลล์เพื่อตรวจหาโคโลนีของเชื้ออีโคไล

แบคทีเรียโคลิฟอร์มหมายถึงกลุ่มของแบคทีเรียที่ไม่ใช่บาซิลลัสแกรมลบที่สามารถหมักแลคโตส ทำให้เกิดกรดและก๊าซ แอโรบิกและคณะแบบไม่ใช้ออกซิเจน ในการใช้งานจริง มักใช้เป็นตัวบ่งชี้ว่าอาหารปนเปื้อนอุจจาระหรือไม่ ในบรรดาวิธีการตรวจจับทั้งหมด การใช้ cell culture flasks สำหรับการตรวจจับเป็นวิธีที่ใช้กันทั่วไปมากกว่า ขั้นตอนการดำเนินการมีดังนี้:

1. การสุ่มตัวอย่างและการเจือจาง

(1) ตามวิธีปลอดเชื้อ ให้ใส่ตัวอย่างทดสอบ 25 กรัม (หรือ 25 มล.) ลงในขวดเพาะเลี้ยงเซลล์ที่มีน้ำปราศจากเชื้อ 225 มล. (จำนวนเม็ดแก้วที่เหมาะสมในขวดที่กำหนดไว้ล่วงหน้า) หรือปูนขาวที่ผ่านการฆ่าเชื้อแล้ว และเขย่าให้ทั่ว หรือบดให้เจือจางสม่ำเสมอ 1:10 ควรใช้ Homogenizer ปลอดเชื้อสำหรับตัวอย่างที่เป็นของแข็งและปั่นแยกด้วยความเร็ว 8000~10000r/min เป็นเวลา 1 นาทีเพื่อทำให้เจือจาง 1:10

(2) ใช้หลอดปลอดเชื้อ 1 มล. ดูด 1 มิลลิลิตรของเจือจาง 1:10 เทลงในหลอดทดลองที่มีน้ำปราศจากเชื้อ 9 มล. เขย่าและผสมให้เจือจาง 1:100 แทนที่ด้วยหลอดฆ่าเชื้อ 1 มล. กด การดำเนินการข้างต้นจะทำต่อเนื่อง 10 ครั้งเจือจางแบบอนุกรม .

(3) ตามข้อกำหนดด้านสุขอนามัยอาหารหรือการประมาณการการปนเปื้อนของตัวอย่างทดสอบ ให้เลือกการเจือจางสามรายการและฉีดวัคซีน 3 หลอดสำหรับการเจือจางแต่ละครั้ง นอกจากนี้ยังสามารถฉีดวัคซีนโดยตรงกับกลุ่มตัวอย่าง.

2. การทดสอบการหมักครั้งแรกของแลคโตส

สิ่งนี้มักเรียกว่าการทดสอบสมมุติฐาน โดยมีวัตถุประสงค์เพื่อตรวจสอบตัวอย่างแบคทีเรียที่หมักแลคโตสเพื่อผลิตก๊าซ ตัวอย่างที่จะทดสอบได้รับการฉีดวัคซีนในหลอดหมักเกลือแลคโตสโดยใช้หลอดหมักเกลือน้ำดีแลคโตสคู่สำหรับหัวเชื้อที่สูงกว่า 1 มล.; หลอดหมักเกลือแลคโตสน้ำดีเดี่ยวใช้สำหรับ 1 มล. และน้อยกว่า 1 มล. เพาะเชื้อ 3 หลอดสำหรับการเจือจางแต่ละครั้ง และใส่ไว้ในตู้อบ 36±1℃ เป็นเวลา 24±2 ชั่วโมง หากหลอดหมักเกลือแลคโตสทั้งหมดไม่ผลิตก๊าซ ก็สามารถรายงานได้ว่าเป็นผลลบต่อแบคทีเรียโคลิฟอร์ม หากมีการผลิตก๊าซ ให้ทำตามขั้นตอนด้านล่าง

3. การเพาะเลี้ยงการแยกจากกัน

หลอดสำหรับหมักที่ผลิตก๊าซมีริ้วและเพาะเชื้อบนเพลต eosin methylene blue agar และเพาะเลี้ยงในตู้ฟักที่อุณหภูมิ 36±1°C เป็นเวลา 18-24 ชั่วโมง จากนั้นสังเกตสัณฐานวิทยาของอาณานิคมและทำการทดสอบการย้อมแกรม การตรวจด้วยกล้องจุลทรรศน์ และการทดสอบการหมักซ้ำ

4 การทดสอบการหมักแลคโตสสองครั้ง

การทดสอบที่เรียกว่าการยืนยัน ซึ่งมีจุดประสงค์เพื่อพิสูจน์ว่าแบคทีเรียที่ไม่ใช่แบคทีเรียแกรมลบที่แยกได้จากหลอดทดลองที่เป็นบวกในการทดสอบการหมักแลคโตสเบื้องต้นสามารถหมักแลคโตสเพื่อผลิตก๊าซได้อย่างแท้จริง บนตัวกลาง EMB แบบคัดเลือกที่กล่าวถึงข้างต้น ให้เลือกโคลิฟอร์มที่น่าสงสัย 1 ถึง 2 โคโลนีสำหรับการย้อมแกรม และฉีดวัคซีนในหลอดหมักแลคโตสพร้อมกัน และวางไว้ในตู้ฟักที่อุณหภูมิ 36±l°C เป็นเวลา 24±2 ชั่วโมงเพื่อสังเกตก๊าซ การผลิต. . ในกรณีที่หลอดหมักแลคโตสผลิตก๊าซและคราบแกรมเป็นลบ แบคทีเรียที่ปราศจากบาซิลลัสจะถูกรายงานว่าเป็นผลบวกต่อโคลิฟอร์ม ในกรณีที่หลอดหมักแลคโตสไม่ผลิตก๊าซหรือคราบแกรมเป็นค่าบวก มีรายงานว่าเป็นลบสำหรับโคลิฟอร์ม

ข้างต้นเป็นวิธีการทำงานของการใช้ ขวดเพาะเลี้ยงเซลล์ เพื่อตรวจหาตัวบ่งชี้กลุ่มอีโคไล Escherichia coli เป็นตัวบ่งชี้สำคัญที่สะท้อนว่าอาหารมีการปนเปื้อนหรือไม่ การเรียนรู้วิธีตรวจจับอย่างเชี่ยวชาญเป็นทักษะพื้นฐานที่ผู้ตรวจสอบอาหารทุกคนควรมี

The FAI climbed 5.9 percent year-on-year in the first 11 months of 2018, quickening from the 5.7-percent growth in Jan-Oct, the National Bureau of Statistics (NBS) said Friday in an online statement.

The key indicator of investment, dubbed a major growth driver, hit the bottom in August and has since started to rebound steadily.

In the face of emerging economic challenges home and abroad, China has stepped up efforts to stabilize investment, in particular rolling out measures to motivate private investors and channel funds into infrastructure.

Friday's data showed private investment, accounting for more than 60 percent of the total FAI, expanded by a brisk 8.7 percent.

NBS spokesperson Mao Shengyong said funds into weak economic links registered rapid increases as investment in environmental protection and agriculture jumped 42 percent and 12.5 percent respectively, much faster than the average.

In breakdown, investment in high-tech and equipment manufacturing remained vigorous with 16.1-percent and 11.6-percent increases respectively in the first 11 months. Infrastructure investment gained 3.7 percent, staying flat. Investment in property development rose 9.7 percent, also unchanged.