English
จานเพาะเลี้ยงเซลล์เป็นเครื่องมือทางชีวภาพชนิดหนึ่ง แบ่งออกเป็นก้นแบนและก้นกลมตามรูปร่าง จำนวนหลุม ได้แก่ 6 หลุม 12 หลุม 24 หลุม 48 หลุม 96 หลุม 384 หลุม ฯลฯ ส่วนใหญ่ใช้สำหรับการเพาะเลี้ยงเซลล์และยังสามารถใช้สำหรับการวัด ความเข้มข้นของโปรตีน แผ่น 96 หลุมมักใช้สำหรับการตรวจจับ MTT
MTT method หรือที่เรียกว่า MTT colorimetric method เป็นวิธีการตรวจหาการอยู่รอดและการเติบโตของเซลล์ หลักการตรวจจับคือ ซัคซิเนตดีไฮโดรจีเนสในไมโตคอนเดรียของเซลล์ที่มีชีวิตสามารถลด MTT จากภายนอกไปเป็นฟอร์มาซานคริสตัลสีน้ำเงินและม่วงที่ไม่ละลายน้ำ (ฟอร์มาซาน) และสะสมไว้ในเซลล์ ในขณะที่เซลล์ที่ตายแล้วไม่มีหน้าที่ดังกล่าว ไดเมทิลซัลฟอกไซด์ (DMSO) สามารถละลายฟอร์มาซานในเซลล์ และค่าการดูดกลืนแสงของมันถูกวัดที่ 570 นาโนเมตรด้วยอิมมูโนแอสเซย์ที่เชื่อมโยงกับเอนไซม์ ซึ่งสามารถสะท้อนจำนวนเซลล์ที่มีชีวิตโดยอ้อม ภายในช่วงหมายเลขเซลล์จำนวนหนึ่ง ปริมาณของการเกิดผลึก MTT จะเป็นสัดส่วนกับจำนวนเซลล์ ขั้นตอนการตรวจหามีดังนี้:
1
เพาะเลี้ยงเซลล์ใน 96-แผ่นการเพาะเลี้ยงเซลล์ หลังจากที่ความหนาแน่นของเซลล์เหมาะสมแล้ว ให้เพิ่ม 50ul MTT ให้กับแต่ละหลุมและทำการเพาะเลี้ยงต่อไปเป็นเวลา 4 ชั่วโมง;
2
กำจัดสื่อวัฒนธรรมที่มี MTT และเพิ่ม 150ul ของ DMSO สั่นในแนวนอนเป็นเวลา 10 นาทีเพื่อให้ผลึกละลายจนหมด สำหรับเซลล์ที่ถูกแขวนลอย หลังจากการปั่นเหวี่ยง suck away theตัวกลาง แล้วเพิ่ม DMSO เพื่อละลาย;
3 วัดค่าการดูดกลืนแสงที่ 550 นาโนเมตรบนเครื่องมืออิมมูโนแอสเซย์ที่เชื่อมโยงกับเอนไซม์ (กำหนดกลุ่มควบคุมที่เหมาะสมและกลุ่มว่าง)
4 อัตราการรอดชีวิตของเซลล์=ค่าการดูดซับของกลุ่มทดลอง/ค่าการดูดซับของกลุ่มควบคุม*100%.
ควรสังเกตระหว่างการดำเนินการว่า MTT เป็นสารก่อมะเร็ง ถ้าเป็นไปได้ให้ลองสวมถุงมือชนิดฟิล์มใส MTT ที่เตรียมไว้จะต้องปลอดเชื้อ MTT มีความไวต่อแบคทีเรียมาก ไม่สำคัญว่าคุณจะเพิ่มลงในเพลตเพาะเซลล์ 96 หลุมโดยไม่ปกป้องจากแสงหรือไม่ ท้ายที่สุดแล้ว เวลามีน้อย หรือคุณสามารถปิดไฟบนคอนโซลได้
The FAI climbed 5.9 percent year-on-year in the first 11 months of 2018, quickening from the 5.7-percent growth in Jan-Oct, the National Bureau of Statistics (NBS) said Friday in an online statement.
The key indicator of investment, dubbed a major growth driver, hit the bottom in August and has since started to rebound steadily.
In the face of emerging economic challenges home and abroad, China has stepped up efforts to stabilize investment, in particular rolling out measures to motivate private investors and channel funds into infrastructure.
Friday's data showed private investment, accounting for more than 60 percent of the total FAI, expanded by a brisk 8.7 percent.
NBS spokesperson Mao Shengyong said funds into weak economic links registered rapid increases as investment in environmental protection and agriculture jumped 42 percent and 12.5 percent respectively, much faster than the average.
In breakdown, investment in high-tech and equipment manufacturing remained vigorous with 16.1-percent and 11.6-percent increases respectively in the first 11 months. Infrastructure investment gained 3.7 percent, staying flat. Investment in property development rose 9.7 percent, also unchanged.