การใช้ขวดเพาะเลี้ยงเซลล์ในการตรวจสอบแบคทีเรียไลโซเจนิค

แบคทีเรียไลโซเจนิกหมายถึงแบคทีเรียที่มีการพยากรณ์ที่รวมเข้ากับโครโมโซมของพวกมัน และสามารถเติบโตและขยายพันธุ์ได้ตามปกติโดยไม่ต้องแตกสลาย แบคทีเรียชนิดอ่อนมีการใช้กันอย่างแพร่หลายในด้านการถ่ายโอนข้อมูล พาหะทางพันธุวิศวกรรม และอณูชีววิทยา สามารถใช้ cell culture flask เพื่อตรวจสอบการเกิดไลโซเจเนอรีของแบคทีเรียได้ วิธีดำเนินการเฉพาะมีดังนี้:

1. การเพาะเลี้ยงแบคทีเรีย lysogenic: เพาะเชื้อ E. coli 225 (λ) ที่กระตุ้นโดยความชัน LB ลงในขวดเพาะเลี้ยงเซลล์ขนาด 250 มล. ที่บรรจุสารละลายเพาะ LB ขนาด 20 มล. เขย่าที่อุณหภูมิ 30°C เป็นเวลา 16 ชั่วโมง จากนั้นจึงนำสารแขวนลอยของแบคทีเรีย 2 มล. จากนั้น เชื่อมต่อกับอีกขวดหนึ่ง ในขวดรูปชมพู่ขนาด 250 มล. ที่บรรจุน้ำซุป LB 20 มล. เขย่าขวดที่อุณหภูมิ 37°C เป็นเวลา 2 ชั่วโมงถึงเฟสลอการิทึม

2 ไม่รวมฟาจอิสระ: ถ้าสายพันธุ์ที่จะทดสอบคือบาซิลลัส สามารถทำให้เป็นสปอร์สารแขวนลอย จากนั้นบำบัดที่ 80°C เป็นเวลา 10 นาทีเพื่อฆ่าเชื้อฟาจที่อาจดูดซับและปลอดจากแบคทีเรียไลโซเจนิกบนพื้นผิว ถ้าสายพันธุ์ที่จะทดสอบไม่ใช่บาซิลลัส ให้ใช้ antiserum ที่เตรียมโดยฟาจหรือสารละลายโซเดียมซิเตรต 0.2% เพื่อล้างเซลล์ไลโซเจนของล็อกเฟสเพื่อกำจัดฟาจที่ดูดซับบนพื้นผิวและปราศจากฟาจ หลังจากการปั่นเหวี่ยงที่ 4000 รอบ/นาที เป็นเวลา 10 นาที สามารถเพิ่มส่วนลอยเหนือตะกอนด้วยแบคทีเรียตัวบ่งชี้ที่ละเอียดอ่อนสำหรับการกำหนดหาเพลตสองชั้น ซึ่งใช้เพื่อทดสอบฟาจอิสระของตัวอย่างและฟาจที่ดูดซับแบคทีเรียไลโซเจนิก ฟาจหลังจากการปั่นเหวี่ยง เซลล์จะถูกเหนี่ยวนำ.

3. การเหนี่ยวนำของแบคทีเรียไลโซเจนิก: แบคทีเรียที่เก็บรวบรวมหลังจากการปั่นแยกจะถูกล้างสองครั้งด้วยน้ำเกลือปกติที่ปราศจากเชื้อ และทำให้เป็นความเข้มข้นสุดท้ายที่ 1,011 เซลล์/มล. ด้วยน้ำเกลือปกติหรือ 100 มิลลิโมล/ลิตร บัฟเฟอร์ Tris-HCL (pH7.0) สำหรับสารแขวนลอยของแบคทีเรีย ให้เติม สารแขวนลอยแบคทีเรีย 5 มล. ในแต่ละจาน ฉายรังสีด้วยหลอด UV 30W ที่ระยะ 30 ซม. เป็นเวลา 30 วินาที เติมสารละลาย LB ความเข้มข้นสองเท่าทันที 5 มล. ผสมให้เข้ากันและบ่มในที่มืดที่อุณหภูมิ 37°C เป็นเวลา 2 ชม.

4. การตรวจสอบสายพันธุ์ไลโซเจนิก: ดำเนินการตามวิธีวุ้นสองชั้น เติมคลอโรฟอร์มสองสามหยดลงในไลเซตที่เหนี่ยวนำข้างต้น และเจือจางอย่างเหมาะสมด้วยวิธีเจือจาง 10 เท่า หลังจากเลือกการเจือจางทั้งสามของการเจือจางแล้ว ให้ใช้ 0.3 มล. ต่อการเจือจางแต่ละครั้ง ผสมให้เข้ากันกับสารแขวนลอย E. coli 226 แบคทีเรียที่ไวต่อเฟสลอการิทึม 0.2 มล. จากนั้นเติมสื่อครึ่งตัว LB ที่ละลายและทำให้เย็นลงถึง 45°C ผสมทันที แล้วเทลงบนจานสื่อที่เป็นของแข็ง LB หลังจากการแข็งตัว 37 ฟักที่ ℃ เป็นเวลา 6 ชั่วโมงและสังเกต หากมีคราบจุลินทรีย์จำนวนมากปรากฏบนจานเพาะเลี้ยง แสดงว่าสายพันธุ์ที่ทดสอบคือไลโซเจน

ในการตรวจสอบว่าแบคทีเรียมีคุณสมบัติในการสลายไลโซเจนิกหรือไม่ ให้ทำตามขั้นตอนข้างต้น ให้ความสนใจกับความปลอดเชื้อของกระบวนการระหว่างการทำงานเพื่อหลีกเลี่ยงการทำงานที่ไม่เหมาะสมซึ่งส่งผลต่อผลการทดสอบ

The FAI climbed 5.9 percent year-on-year in the first 11 months of 2018, quickening from the 5.7-percent growth in Jan-Oct, the National Bureau of Statistics (NBS) said Friday in an online statement.

The key indicator of investment, dubbed a major growth driver, hit the bottom in August and has since started to rebound steadily.

In the face of emerging economic challenges home and abroad, China has stepped up efforts to stabilize investment, in particular rolling out measures to motivate private investors and channel funds into infrastructure.

Friday's data showed private investment, accounting for more than 60 percent of the total FAI, expanded by a brisk 8.7 percent.

NBS spokesperson Mao Shengyong said funds into weak economic links registered rapid increases as investment in environmental protection and agriculture jumped 42 percent and 12.5 percent respectively, much faster than the average.

In breakdown, investment in high-tech and equipment manufacturing remained vigorous with 16.1-percent and 11.6-percent increases respectively in the first 11 months. Infrastructure investment gained 3.7 percent, staying flat. Investment in property development rose 9.7 percent, also unchanged.