การใช้ขวดเพาะเลี้ยงเซลล์ในการทดลองสลายเซลล์

การสลายเซลล์เป็นวิธีการทดลองที่สำคัญในการเปลี่ยนแปลงความสามารถในการซึมผ่านของเซลล์และกิจกรรม หมายความว่าหลังจากที่เซลล์ติดไวรัส ไวรัสจะใช้สารอาหารในเซลล์เจ้าบ้านเพื่อสังเคราะห์ลูกหลานของตัวเอง จากนั้นลูกหลานของไวรัสจะทำลายเซลล์เจ้าบ้านและปล่อยออกจากเซลล์ ในการทดลองสลายเซลล์ cell culture flasks เป็นวัสดุสิ้นเปลืองทั่วไป ขั้นตอนสำหรับการสลายเซลล์มีดังนี้:

1. เทอาหารเลี้ยงเชื้อออกมา และปิดขวดเพาะเลี้ยงเซลล์คว่ำลงบนกระดาษดูดซับเพื่อให้กระดาษดูดซับดูดซับอาหารเลี้ยงเชื้อ (หรือวางขวดให้ตั้งตรงครู่หนึ่งเพื่อให้อาหารเลี้ยงเชื้อที่เหลือไหลลงด้านล่างของขวด แล้วใช้ปิเปตดูดออก ).

2. เพิ่ม 3ml ของ 4℃ pre-cooled PBS (0.01M pH7.2~7.3) ลงในเซลล์แต่ละขวด วางเซลล์ให้แบนและเขย่าเบา ๆ เป็นเวลา 1 นาทีเพื่อล้างเซลล์ จากนั้นทิ้งน้ำยาซักผ้า ทำซ้ำการดำเนินการข้างต้นสองครั้ง ล้างเซลล์สามครั้งเพื่อล้างของเหลวเพาะเลี้ยงออก ทิ้ง PBS และวางขวดวัฒนธรรมบนน้ำแข็ง

3 เพิ่ม 10ul PMSF (100mM) ลงในบัฟเฟอร์ lysis 1ml เขย่าให้เข้ากันแล้ววางบนน้ำแข็ง (PMSF ต้องเขย่าจนไม่มีผลึกก่อนที่จะผสมกับสารละลายสลาย)

4. เติมบัฟเฟอร์ lysis 400ul ที่มี PMSF ลงในขวดแต่ละเซลล์ และละลายบนน้ำแข็งเป็นเวลา 30 นาที ในการสลายเซลล์ให้สมบูรณ์ ต้องเขย่าขวดบ่อยๆ

5. หลังจากการสลาย ให้ใช้ที่ขูดที่สะอาดเพื่อขูดเซลล์ที่ด้านหนึ่งของขวดเพาะเชื้อ (การดำเนินการควรเร็ว) จากนั้นใช้ปืนเพื่อเคลื่อนย้ายเศษเซลล์และสลายไปยังหลอดสำหรับการปั่นแยกขนาด 1.5 มล. (การดำเนินการทั้งหมดควรทำบนน้ำแข็งให้มากที่สุด)

6. ปั่นแยกที่ 12000 รอบต่อนาที ที่ 4°C เป็นเวลา 5 นาที (เปิดเครื่องหมุนเหวี่ยงล่วงหน้าเพื่อ pre-cool)

7. ถ่ายเท supernatant ที่หมุนเหวี่ยงไปยังหลอด centrifuge เป็นเวลา 0.5 นาที และเก็บไว้ที่อุณหภูมิ -20°C.

ขวดเพาะเลี้ยงเซลล์ ไม่เพียงแต่ใช้สำหรับการทดลองสลายเซลล์เท่านั้น แต่ยังใช้สำหรับเซลล์ขนาดกลางและการเพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อในห้องปฏิบัติการ เช่น เซลล์ Vero , เซลล์ HEK 293, เซลล์ CAR-T, เซลล์ CHO, เซลล์แมลง ฯลฯ

The FAI climbed 5.9 percent year-on-year in the first 11 months of 2018, quickening from the 5.7-percent growth in Jan-Oct, the National Bureau of Statistics (NBS) said Friday in an online statement.

The key indicator of investment, dubbed a major growth driver, hit the bottom in August and has since started to rebound steadily.

In the face of emerging economic challenges home and abroad, China has stepped up efforts to stabilize investment, in particular rolling out measures to motivate private investors and channel funds into infrastructure.

Friday's data showed private investment, accounting for more than 60 percent of the total FAI, expanded by a brisk 8.7 percent.

NBS spokesperson Mao Shengyong said funds into weak economic links registered rapid increases as investment in environmental protection and agriculture jumped 42 percent and 12.5 percent respectively, much faster than the average.

In breakdown, investment in high-tech and equipment manufacturing remained vigorous with 16.1-percent and 11.6-percent increases respectively in the first 11 months. Infrastructure investment gained 3.7 percent, staying flat. Investment in property development rose 9.7 percent, also unchanged.