การตรวจหากิจกรรมของเซลล์ในโรงงานผลิตเซลล์ - วิธี MTT

เป็นวัสดุสิ้นเปลืองที่มักใช้สำหรับการเพาะเลี้ยงเซลล์แบบยึดติด ในระหว่างการทดลอง เราจำเป็นต้องเข้าใจสถานะการเติบโตของเซลล์แบบเรียลไทม์และทำการปรับเปลี่ยนที่เกี่ยวข้องตามสถานการณ์เฉพาะ สามารถตรวจพบความมีชีวิตของเซลล์ด้วยวิธี MTT เพื่อกำหนดการเติบโตของเซลล์MTT method หรือที่เรียกว่า MTT colorimetric method เป็นวิธีการตรวจหาการอยู่รอดและการเติบโตของเซลล์ หลักการตรวจจับคือ ซัคซิเนตดีไฮโดรจีเนสในไมโตคอนเดรียของเซลล์ที่มีชีวิตสามารถลด MTT จากภายนอกไปเป็นฟอร์มาซานผลึกสีน้ำเงินม่วงที่ไม่ละลายน้ำและสะสมในเซลล์ ในขณะที่เซลล์ที่ตายแล้วไม่มีหน้าที่ดังกล่าว ไดเมทิลซัลฟอกไซด์ (DMSO) สามารถละลายฟอร์มาซานในเซลล์ และสามารถวัดค่าการดูดกลืนแสงได้ด้วยการทดสอบอิมมูโนดูดซับที่เชื่อมโยงกับเอนไซม์ที่ความยาวคลื่น 570 นาโนเมตร ซึ่งสามารถสะท้อนจำนวนเซลล์ที่มีชีวิตโดยอ้อม ภายในช่วงหมายเลขเซลล์หนึ่งๆ ปริมาณของการเกิดผลึก MTT จะเป็นสัดส่วนกับจำนวนเซลล์ วิธีนี้มีการใช้กันอย่างแพร่หลายในการตรวจหากิจกรรมของปัจจัยออกฤทธิ์ทางชีวภาพ การตรวจคัดกรองยาต้านเนื้องอกในวงกว้าง การทดสอบความเป็นพิษต่อเซลล์ และการทดสอบความไวต่อรังสีของเนื้องอก โดดเด่นด้วยความไวสูงและประหยัดcell factory

ก่อนการทดสอบความมีชีวิตของเซลล์ในโรงงานผลิตเซลล์ ขั้นตอนที่สำคัญมากคือการกำหนดสูตรของ MTT โดยทั่วไป ความเข้มข้นของ MTT ในวิธีนี้คือ 5 มก./มล. ดังนั้น สามารถชั่งน้ำหนัก MTT ได้ 0.5 กรัม ละลายในน้ำเกลือที่มีบัฟเฟอร์ฟอสเฟต (PBS) 100 มล. หรือสารที่ปราศจากฟีนอลเรด กรองด้วยตัวกรอง 0.22 μm เพื่อขจัดแบคทีเรียในสารละลาย และเก็บไว้ในที่มืดที่อุณหภูมิ 4°C . . ระหว่างการเตรียมและการเก็บรักษา ให้ลองห่อภาชนะด้วยกระดาษฟอยล์อลูมิเนียม

เมื่อใช้วิธี MTT ในการวัดการทำงานของเซลล์ในโรงงานผลิตเซลล์ ควรสังเกตว่า MTT เป็นสารก่อมะเร็ง ดังนั้นควรระมัดระวังในการใช้งาน วิธีนี้ใช้ได้เฉพาะเพื่อตรวจหาจำนวนเซลล์สัมพัทธ์และความมีชีวิตสัมพัทธ์ แต่ไม่ใช่จำนวนเซลล์แบบสัมบูรณ์ เมื่อทดสอบผลลัพธ์ด้วยเครื่องอ่านไมโครเพลท เพื่อให้แน่ใจว่าผลการทดลองเป็นเส้นตรง การดูดกลืนแสง MTT ควรอยู่ในช่วง 0-0.7 ให้มากที่สุด

When using the MTT method to measure the cell activity in the cell factory, it should be noted that MTT is carcinogenic, so be careful when using it. This method can only be used to detect relative cell number and relative viability, but not absolute cell number. When testing the results with a microplate reader, in order to ensure the linearity of the experimental results, the MTT absorbance should be in the range of 0-0.7 as much as possible.

The FAI climbed 5.9 percent year-on-year in the first 11 months of 2018, quickening from the 5.7-percent growth in Jan-Oct, the National Bureau of Statistics (NBS) said Friday in an online statement.

The key indicator of investment, dubbed a major growth driver, hit the bottom in August and has since started to rebound steadily.

In the face of emerging economic challenges home and abroad, China has stepped up efforts to stabilize investment, in particular rolling out measures to motivate private investors and channel funds into infrastructure.

Friday's data showed private investment, accounting for more than 60 percent of the total FAI, expanded by a brisk 8.7 percent.

NBS spokesperson Mao Shengyong said funds into weak economic links registered rapid increases as investment in environmental protection and agriculture jumped 42 percent and 12.5 percent respectively, much faster than the average.

In breakdown, investment in high-tech and equipment manufacturing remained vigorous with 16.1-percent and 11.6-percent increases respectively in the first 11 months. Infrastructure investment gained 3.7 percent, staying flat. Investment in property development rose 9.7 percent, also unchanged.