English
Lysogena bakterier avser bakterier som har profeter integrerade på sina kromosomer och som kan växa och föröka sig normalt utan att lyseras. Milda bakteriofager har använts i stor utsträckning inom områdena transduktion, genteknikvektorer och molekylärbiologi. cellkulturflask kan användas för att kontrollera lysogeniciteten hos bakterier. Den specifika operationsmetoden är som följer:
1. Odling av lysogena bakterier: Inokulera E. coli 225 (λ) aktiverad av LB-sluttningen i en 250 ml cellodlingskolv innehållande 20 ml LB-odlingslösning, odla med skakning vid 30°C i 16 timmar och ta sedan 2 ml bakteriesuspension från den och anslut den till en annan I en 250 ml Erlenmeyer-kolv innehållande 20 ml LB-buljong, odla med skakning vid 37°C i 2 timmar till logaritmisk fas.
2. Uteslut fri fag: Om stammen som ska testas är Bacillus, kan den göras till en sporsuspension och sedan behandlas vid 80°C i 10 minuter för att döda fagen som kan vara adsorberad och fri på ytan av de lysogena bakterierna; om stammen som ska testas är icke-Bacillus, använd antiserum framställt av fag eller 0,2 % natriumcitratlösning för att tvätta log-fas lysogenceller för att avlägsna ytadsorberad och fri fag. Efter centrifugering vid 4000 r/min i 10 minuter kan supernatanten tillsättas med känsliga indikatorbakterier för dubbelskiktsplattbestämning, som används för att testa provets fria fag och fagen som adsorberar de lysogena bakterierna. Fagen efter centrifugering Cellerna induceras.
3. Induktion av lysogena bakterier: bakterierna som samlats in efter centrifugering tvättas två gånger med steril normal koksaltlösning och görs till en slutlig koncentration av 1011 celler/ml med normal koksaltlösning eller 100 mmol/l Tris-HCL-buffert (pH7,0) För bakteriesuspension, tillsätt 5 ml bakteriesuspension till varje skål, bestråla med en 30W UV-lampa på ett avstånd av 30 cm i 30 s, tillsätt omedelbart 5 ml dubbelkoncentrerad LB-odlingslösning, blanda väl och inkubera i mörker vid 37°C i 2 timmar.
4. Inspektion av lysogena stammar: Arbeta enligt dubbelskiktsagarmetoden, tillsätt några droppar kloroform till ovanstående inducerade lysat och späd på lämpligt sätt med 10-faldig spädningsmetoden. Efter att ha valt de tre spädningarna av spädningen, ta 0,3 ml för varje spädning. Blanda väl med 0,2 ml logaritmisk faskänslig E. coli 226 bakteriesuspension, tillsätt sedan LB halvkroppsmedium som har smält och kylts till 45°C, blanda omedelbart och häll det sedan på LB fast medium plattan. Efter stelning, 37 Inkubera vid ℃ i 6 timmar och observera. Om ett stort antal plack uppträder på den odlade plattan, bevisar det att den testade stammen är en lysogen.
Följ stegen ovan för att kontrollera om bakterierna har lysogenicitet. Var uppmärksam på processens sterilitet under drift för att undvika felaktig drift som påverkar testresultaten.
The FAI climbed 5.9 percent year-on-year in the first 11 months of 2018, quickening from the 5.7-percent growth in Jan-Oct, the National Bureau of Statistics (NBS) said Friday in an online statement.
The key indicator of investment, dubbed a major growth driver, hit the bottom in August and has since started to rebound steadily.
In the face of emerging economic challenges home and abroad, China has stepped up efforts to stabilize investment, in particular rolling out measures to motivate private investors and channel funds into infrastructure.
Friday's data showed private investment, accounting for more than 60 percent of the total FAI, expanded by a brisk 8.7 percent.
NBS spokesperson Mao Shengyong said funds into weak economic links registered rapid increases as investment in environmental protection and agriculture jumped 42 percent and 12.5 percent respectively, much faster than the average.
In breakdown, investment in high-tech and equipment manufacturing remained vigorous with 16.1-percent and 11.6-percent increases respectively in the first 11 months. Infrastructure investment gained 3.7 percent, staying flat. Investment in property development rose 9.7 percent, also unchanged.