English
Celllys är en viktig experimentell metod för att ändra cellpermeabilitet och aktivitet. Det betyder att efter att en cell har infekterats av ett virus, använder viruset näringsämnena i värdcellen för att syntetisera sin egen avkomma, och sedan förstör virusavkomman värdcellen och släpps ut ur cellerna. I cellysexperiment är cellodlingsflaskor en vanlig förbrukningsvara. Stegen för celllys är som följer:
1. Häll ut odlingsmediet och spänn cellodlingsflaskan upp och ner på absorberande papper så att det absorberande pappret kommer att absorbera odlingsmediet (eller ställ flaskan upprätt en stund för att låta det kvarvarande odlingsmediet rinna till botten av flaskan och använd sedan en pipett för att suga bort den ).
2. Tillsätt 3 ml 4℃ förkyld PBS (0,01M pH7,2～7.3) till varje flaska med celler. Lägg cellerna platt och skaka försiktigt i 1 min för att tvätta cellerna och kassera sedan tvättlösningen. Upprepa ovanstående operation två gånger, tvätta cellerna tre gånger för att tvätta bort odlingsvätskan. Kassera PBS och placera odlingskolven på is.
3. Tillsätt 10 ul PMSF (100 mM) till 1 ml lyseringsbuffert, skaka väl och lägg på is. (PMSF måste skakas tills det inte finns några kristaller innan det blandas med lyslösningen.)
4. Tillsätt 400 ul lysbuffert innehållande PMSF till varje kolv med celler och lysera på is i 30 minuter. För att helt lysera cellerna måste kolven skakas ofta.
5. Efter lysering, använd en ren skrapa för att skrapa cellerna på ena sidan av odlingskolven (åtgärden bör vara snabb), och använd sedan en pistol för att flytta cellrester och lysat till ett 1,5 ml centrifugrör. (Hela operationen bör göras på is så mycket som möjligt.)
6. Centrifugera vid 12000 rpm vid 4°C i 5 min. (Sätt på centrifugen i förväg för att förkyla)
7. Överför den centrifugerade supernatanten till ett centrifugrör i 0,5 min och förvara den vid -20°C. , HEK 293-celler, CAR-T-celler, CHO-celler, insektsceller, etc.
Cell culture flasksCellodlingsflaskor
The FAI climbed 5.9 percent year-on-year in the first 11 months of 2018, quickening from the 5.7-percent growth in Jan-Oct, the National Bureau of Statistics (NBS) said Friday in an online statement.
The key indicator of investment, dubbed a major growth driver, hit the bottom in August and has since started to rebound steadily.
In the face of emerging economic challenges home and abroad, China has stepped up efforts to stabilize investment, in particular rolling out measures to motivate private investors and channel funds into infrastructure.
Friday's data showed private investment, accounting for more than 60 percent of the total FAI, expanded by a brisk 8.7 percent.
NBS spokesperson Mao Shengyong said funds into weak economic links registered rapid increases as investment in environmental protection and agriculture jumped 42 percent and 12.5 percent respectively, much faster than the average.
In breakdown, investment in high-tech and equipment manufacturing remained vigorous with 16.1-percent and 11.6-percent increases respectively in the first 11 months. Infrastructure investment gained 3.7 percent, staying flat. Investment in property development rose 9.7 percent, also unchanged.