English
Lyzogénne baktérie označujú baktérie, ktoré majú profágy integrované na svojich chromozómoch a môžu normálne rásť a reprodukovať sa bez toho, aby boli lýzované. Mierne bakteriofágy sa široko používajú v oblasti transdukcie, vektorov genetického inžinierstva a molekulárnej biológie. bunková kultivačná banka možno použiť na kontrolu lyzogenity baktérií. Špecifická prevádzková metóda je nasledovná:
1. Kultúra lyzogénnych baktérií: Inokulujte E. coli 225 (λ) aktivovanú sklonom LB do 250 ml banky na kultiváciu buniek obsahujúcej 20 ml roztoku kultúry LB, kultivujte za trepania pri 30 °C počas 16 hodín a potom z nej odoberte 2 ml bakteriálnej suspenzie a pripojte ju k ďalšej V 250 ml Erlenmeyerovej banke obsahujúcej 20 ml LB bujónu, kultivujte za trepania pri 37 °C počas 2 hodín do logaritmickej fázy.
2. Vylúčte voľný fág: Ak je kmeň, ktorý sa má testovať, Bacillus, môže sa z neho urobiť suspenzia spór a potom sa spracuje pri teplote 80 °C počas 10 minút, aby sa zabil fág, ktorý sa môže adsorbovať a uvoľniť sa na povrchu lyzogénnych baktérií; ak testovaný kmeň nie je kmeň Bacillus, použite antisérum pripravené fágom alebo 0,2 % roztok citrátu sodného na premytie lyzogénnych buniek log fázy, aby sa odstránil povrch adsorbovaný a voľný fág. Po centrifugácii pri 4000 ot./min. počas 10 minút je možné do supernatantu pridať citlivé indikátorové baktérie na stanovenie dvojvrstvovej platne, ktorá sa používa na testovanie voľného fágu vzorky a fágu, ktorý adsorbuje lyzogénne baktérie. Fág po centrifugácii Bunky sa indukujú.3. Indukcia lyzogénnych baktérií: baktérie zozbierané po centrifugácii sa dvakrát premyjú sterilným normálnym fyziologickým roztokom a upravia sa na konečnú koncentráciu 1011 buniek/ml normálnym fyziologickým roztokom alebo 100 mmol/l Tris-HCL pufra (pH 7,0) Pre bakteriálnu suspenziu pridajte 5 ml bakteriálnej suspenzie do každej misky, ožiarte 30W UV lampou vo vzdialenosti 30 cm na 30 s, ihneď pridajte 5 ml dvojkoncentračného roztoku LB kultúry, dobre premiešajte a inkubujte v tme pri 37°C 2h.
4. Kontrola lyzogénnych kmeňov: Pracujte podľa metódy dvojvrstvového agaru, pridajte niekoľko kvapiek chloroformu do vyššie indukovaného lyzátu a vhodne zrieďte metódou 10-násobného riedenia. Po výbere troch riedení riedenia odoberte 0,3 ml pre každé riedenie. Dobre premiešajte s 0,2 ml suspenzie baktérií E. coli 226 citlivých na logaritmickú fázu, potom pridajte médium polovice tela LB, ktoré bolo roztavené a ochladené na 45 °C, ihneď premiešajte a potom nalejte na platňu s pevným médiom LB. Po stuhnutí, 37 Inkubujte pri ℃ počas 6 hodín a pozorujte. Ak sa na kultivačnej platni objaví veľké množstvo plakov, dokazuje to, že testovaný kmeň je lyzogén. Ak chcete skontrolovať, či baktérie majú lyzogenitu, postupujte podľa vyššie uvedených krokov. Dávajte pozor na sterilitu procesu počas prevádzky, aby ste sa vyhli nesprávnej prevádzke, ktorá ovplyvňuje výsledky testu.
4. Inspection of lysogenic strains: Operate according to the double-layer agar method, add a few drops of chloroform to the above induced lysate, and dilute appropriately with the 10-fold dilution method. After selecting the three dilutions of the dilution, take 0.3ml for each dilution. Mix well with 0.2ml of logarithmic phase sensitive E. coli 226 bacteria suspension, then add LB half-body medium that has been melted and cooled to 45°C, mix immediately, and then pour it onto the LB solid medium plate. After solidification, 37 Incubate at ℃ for 6h and observe. If a large number of plaques appear on the cultured plate, it proves that the tested strain is a lysogen.
To check whether the bacteria have lysogenicity, follow the above steps. Pay attention to the sterility of the process during operation to avoid improper operation that affects the test results.
The FAI climbed 5.9 percent year-on-year in the first 11 months of 2018, quickening from the 5.7-percent growth in Jan-Oct, the National Bureau of Statistics (NBS) said Friday in an online statement.
The key indicator of investment, dubbed a major growth driver, hit the bottom in August and has since started to rebound steadily.
In the face of emerging economic challenges home and abroad, China has stepped up efforts to stabilize investment, in particular rolling out measures to motivate private investors and channel funds into infrastructure.
Friday's data showed private investment, accounting for more than 60 percent of the total FAI, expanded by a brisk 8.7 percent.
NBS spokesperson Mao Shengyong said funds into weak economic links registered rapid increases as investment in environmental protection and agriculture jumped 42 percent and 12.5 percent respectively, much faster than the average.
In breakdown, investment in high-tech and equipment manufacturing remained vigorous with 16.1-percent and 11.6-percent increases respectively in the first 11 months. Infrastructure investment gained 3.7 percent, staying flat. Investment in property development rose 9.7 percent, also unchanged.