English
Материалы и методы
3.1. Культивирование во встряхиваемых колбах
Предварительные культуры суспензионных клеток MDCK.SUS2 выращивали в Клетки культивировали в среде Smif8, не содержащей белков и компонентов животного происхождения, химически определенного состава (Smif8 PGD 2×, с добавлением 5 мМ глутамина и 8 мМ пируват), специально разработанный для культивирования суспензии клеток MDCK [95]. Эксперименты по выращиванию и инфицированию для проверки модели проводились с использованием 500 мл колб для встряхивания (№ 4113-0500, Nalgene™, Thermo Scientific, Waltham, MA, США) с начальным объемом культивирования 200 мл при 150 об/мин. Было проведено два культивирования: одно ложное заражение (культивирование 1), при котором клетки росли в течение примерно 200 ч, и одно заражение (культивирование 2), при котором клетки инфицировали ВГА примерно через 49 ч после инокуляции. Для достижения синхронного заражения клеточной популяции использовали moi = 10. В связи с относительно низкой концентрацией клеток во время заражения (2,1 × 106 клеток/мл) и высоким значением moi не было необходимости ни в замене среды, ни в добавлении трипсина (для активации вируса). В обоих культивациях перед отбором проб добавляли стерильную воду Milli-Q, чтобы компенсировать испарение воды (1–2 мл/день), поскольку эксперимент проводился в инкубаторе без гидратации. (поликарбонатные колбы Эрленмейера на 125 мл, #431143, Corning®, Нью-Йорк, штат Нью-Йорк, США) с рабочим объемом 50 мл (wv) , в инкубаторе Multitron Pro (Infors HT, Боттминген, Швейцария) при 37 °C и атмосфере 5% CO2 при частоте встряхивания 180 об/мин. Клетки пассировали каждые 3–4 дня с плотностью посева 0,5–0,8 × 106 клеток/мл. в прикрепленных клетках MDCK (ECACC № 84121903). Посевной вирус имел титр 1,1 × 109 TCID50/мл.
Источник:
https:/ /www.mdpi.com/2218-1989/12/3/239/htm
Growth and infection experiments for model validation were performed using 500 mL shaking flasks (#4113-0500, Nalgene™, Thermo Scientific, Waltham, MA, USA) with an initial cultivation volume of 200 mL at 150 rpm. Two cultivations were performed, one mock-infection (Cultivation 1), where cells grew for about 200 h, and one infection (Cultivation 2), where cells were infected with IAV at about 49 h post inoculation. To achieve a synchronous infection of the cell population, a moi = 10 was used. Due to the relatively low cell concentration at time of infection (2.1 × 106 cells/mL) and the high moi used, neither medium replacement nor trypsin addition (for virus activation) was necessary. In both cultivations, sterile Milli-Q water was added before sampling to compensate for water evaporation (1–2 mL/day) since the experiment was performed in a non-hydrated incubator.
Source from: https://www.mdpi.com/2218-1989/12/3/239/htm
The FAI climbed 5.9 percent year-on-year in the first 11 months of 2018, quickening from the 5.7-percent growth in Jan-Oct, the National Bureau of Statistics (NBS) said Friday in an online statement.
The key indicator of investment, dubbed a major growth driver, hit the bottom in August and has since started to rebound steadily.
In the face of emerging economic challenges home and abroad, China has stepped up efforts to stabilize investment, in particular rolling out measures to motivate private investors and channel funds into infrastructure.
Friday's data showed private investment, accounting for more than 60 percent of the total FAI, expanded by a brisk 8.7 percent.
NBS spokesperson Mao Shengyong said funds into weak economic links registered rapid increases as investment in environmental protection and agriculture jumped 42 percent and 12.5 percent respectively, much faster than the average.
In breakdown, investment in high-tech and equipment manufacturing remained vigorous with 16.1-percent and 11.6-percent increases respectively in the first 11 months. Infrastructure investment gained 3.7 percent, staying flat. Investment in property development rose 9.7 percent, also unchanged.