English
Лизогенные бактерии относятся к бактериям, которые имеют профаги, интегрированные в их хромосомы, и могут нормально расти и размножаться, не подвергаясь лизису. Мягкие бактериофаги широко используются в области трансдукции, векторов генной инженерии и молекулярной биологии. колба для клеточной культуры можно использовать для проверки лизогенности бактерий. Конкретный метод работы выглядит следующим образом:
1. Культура лизогенных бактерий: Инокулировать E. coli 225 (λ), активированную наклоном LB, в колбу для клеточных культур объемом 250 мл, содержащую 20 мл культурального раствора LB, культивировать при встряхивании при 30°C в течение 16 часов, затем взять из нее 2 мл бактериальной суспензии и соединить его с другим В колбе Эрленмейера на 250 мл, содержащей 20 мл бульона LB, культивировать при встряхивании при 37°C в течение 2 часов до логарифмической фазы.
2. Исключить свободный фаг: если тестируемый штамм представляет собой Bacillus, его можно превратить в суспензию спор, а затем обработать при 80°C в течение 10 минут, чтобы убить фаг, который может быть адсорбирован и свободен на поверхности лизогенных бактерий; если тестируемый штамм не является Bacillus, используйте антисыворотку, приготовленную с помощью фага, или 0,2% раствор цитрата натрия, чтобы отмыть клетки лизогена с логарифмической фазой для удаления поверхностно-адсорбированного и свободного фага. После центрифугирования при 4000 об/мин в течение 10 минут в супернатант можно добавить чувствительные индикаторные бактерии для определения в двухслойных планшетах, которые используются для тестирования свободного фага образца и фага, адсорбирующего лизогенные бактерии. Фаг после центрифугирования Клетки индуцируются.
3. Индукция лизогенных бактерий: бактерии, собранные после центрифугирования, дважды промывают стерильным физиологическим раствором и доводят до конечной концентрации 1011 клеток/мл с помощью физиологического раствора или буфера Tris-HCL 100 ммоль/л (рН 7,0). Для бактериальной суспензии добавьте В каждую чашку по 5 мл взвеси бактерий, облучить УФ-лампой мощностью 30 Вт с расстояния 30 см в течение 30 с, сразу же добавить 5 мл культурального раствора LB двойной концентрации, хорошо перемешать и инкубировать в темноте при 37°С в течение 2 ч.
4. Проверка лизогенных штаммов: работайте в соответствии с методом двухслойного агара, добавляя несколько капель хлороформа к вышеописанному индуцированному лизату и соответствующим образом разбавляя методом 10-кратного разведения. После выбора трех разведений разведения берут по 0,3 мл на каждое разведение. Тщательно перемешайте с 0,2 мл суспензии бактерий E. coli 226, чувствительных к логарифмической фазе, затем добавьте среду для половин тела LB, которая была расплавлена и охлаждена до 45°C, немедленно перемешайте, а затем вылейте ее на планшет с твердой средой LB. После затвердевания 37 Инкубируйте при ℃ в течение 6 часов и наблюдайте. Если на культуральной пластине появляется большое количество бляшек, это доказывает, что тестируемый штамм является лизогеном.
Чтобы проверить, обладают ли бактерии лизогенностью, выполните описанные выше действия. Обратите внимание на стерильность процесса во время работы, чтобы избежать неправильной работы, влияющей на результаты теста.
The FAI climbed 5.9 percent year-on-year in the first 11 months of 2018, quickening from the 5.7-percent growth in Jan-Oct, the National Bureau of Statistics (NBS) said Friday in an online statement.
The key indicator of investment, dubbed a major growth driver, hit the bottom in August and has since started to rebound steadily.
In the face of emerging economic challenges home and abroad, China has stepped up efforts to stabilize investment, in particular rolling out measures to motivate private investors and channel funds into infrastructure.
Friday's data showed private investment, accounting for more than 60 percent of the total FAI, expanded by a brisk 8.7 percent.
NBS spokesperson Mao Shengyong said funds into weak economic links registered rapid increases as investment in environmental protection and agriculture jumped 42 percent and 12.5 percent respectively, much faster than the average.
In breakdown, investment in high-tech and equipment manufacturing remained vigorous with 16.1-percent and 11.6-percent increases respectively in the first 11 months. Infrastructure investment gained 3.7 percent, staying flat. Investment in property development rose 9.7 percent, also unchanged.