English
Лизис клеток является важным экспериментальным методом изменения проницаемости и активности клеток. Это означает, что после заражения клетки вирусом вирус использует питательные вещества в клетке-хозяине для синтеза собственного потомства, а затем потомство вируса разрушает клетку-хозяина и высвобождается из клеток. В экспериментах по лизису клеток колбы для клеточных культур являются обычным расходным материалом. Этапы лизиса клеток следующие:
1. Вылейте культуральную среду и переверните бутылку с клеточной культурой вверх дном на впитывающую бумагу, чтобы впитывающая бумага впитала культуральную среду (или поставьте бутыль на некоторое время вертикально, чтобы остаточная культуральная среда стекла на дно бутылки). а затем используйте пипетку, чтобы высосать его ).
2. Добавьте 3 мл предварительно охлажденного PBS до 4 ℃ (0,01 М pH 7,2 ~ 7,3) в каждую бутылку с клетками. Положите клетки на плоскую поверхность и осторожно встряхните в течение 1 мин, чтобы промыть клетки, а затем выбросьте промывочный раствор. Повторите описанную выше операцию дважды, трижды промывая клетки, чтобы смыть культуральную жидкость. Утилизируйте PBS и поместите колбу с культурой на лед.
3. Добавьте 10 мкл PMSF (100 мМ) к 1 мл лизирующего буфера, хорошо встряхните и поместите на лед. (ПМСФ перед смешиванием с лизисным раствором необходимо встряхнуть до исчезновения кристаллов.)
4. Добавьте 400 мкл буфера для лизиса, содержащего PMSF, в каждую колбу с клетками и лизируйте на льду в течение 30 минут. Для полного лизиса клеток колбу необходимо часто встряхивать.
5. После лизиса используйте чистый скребок, чтобы соскоблить клетки с одной стороны культуральной колбы (действие должно быть быстрым), а затем с помощью пистолета переместите клеточный дебрис и лизат в центрифужную пробирку объемом 1,5 мл. (По возможности вся операция должна проводиться на льду.)
6. Центрифугировать при 12000 об/мин при 4°С в течение 5 мин. (Заранее включите центрифугу для предварительного охлаждения)
7. Перенесите отцентрифугированный супернатант в центрифужную пробирку на 0,5 мин и храните его при температуре -20°C.
Колбы для культивирования клеток используются не только для экспериментов по лизису клеток, но и для среднего масштаба клеточных и тканевых культур в лаборатории, таких как клетки Vero. , клетки HEK 293, клетки CAR-T, клетки CHO, клетки насекомых и т. д.
The FAI climbed 5.9 percent year-on-year in the first 11 months of 2018, quickening from the 5.7-percent growth in Jan-Oct, the National Bureau of Statistics (NBS) said Friday in an online statement.
The key indicator of investment, dubbed a major growth driver, hit the bottom in August and has since started to rebound steadily.
In the face of emerging economic challenges home and abroad, China has stepped up efforts to stabilize investment, in particular rolling out measures to motivate private investors and channel funds into infrastructure.
Friday's data showed private investment, accounting for more than 60 percent of the total FAI, expanded by a brisk 8.7 percent.
NBS spokesperson Mao Shengyong said funds into weak economic links registered rapid increases as investment in environmental protection and agriculture jumped 42 percent and 12.5 percent respectively, much faster than the average.
In breakdown, investment in high-tech and equipment manufacturing remained vigorous with 16.1-percent and 11.6-percent increases respectively in the first 11 months. Infrastructure investment gained 3.7 percent, staying flat. Investment in property development rose 9.7 percent, also unchanged.