English
Liza celulară este o metodă experimentală importantă pentru a modifica permeabilitatea și activitatea celulară. Înseamnă că după ce o celulă este infectată cu un virus, virusul folosește nutrienții din celula gazdă pentru a-și sintetiza propria descendentă, iar apoi descendenții virusului distrug celula gazdă și sunt eliberați din celule. În experimentele de liză celulară, baloane de cultură celulară sunt un consumabil comun. Etapele pentru liza celulară sunt următoarele:
1. Se toarnă mediul de cultură și se înfășoară sticla de cultură celulară cu capul în jos pe hârtie absorbantă, astfel încât hârtia absorbantă să absoarbă mediul de cultură (sau pune sticla în poziție verticală pentru o perioadă pentru a permite mediului de cultură rezidual să curgă la fundul sticlei). și apoi folosiți o pipetă pentru a o aspira ).
2. Adăugați 3 ml de PBS pre-răcit la 4℃ (0,01 M pH7,2～7,3) în fiecare sticlă de celule. Așezați celulele plat și agitați ușor timp de 1 minut pentru a spăla celulele, apoi aruncați soluția de spălare. Repetați operația de mai sus de două ori, spălând celulele de trei ori pentru a spăla fluidul de cultură. Aruncați PBS și puneți balonul de cultură pe gheață.
3. Se adaugă 10 ul PMSF (100 mM) la 1 ml tampon de liză, se agită bine și se pune pe gheață. (PMSF trebuie agitat până când nu există cristale înainte de amestecare cu soluția de liză.)
4. Se adaugă 400 ul de tampon de liză care conține PMSF în fiecare balon de celule și se lizează pe gheață timp de 30 de minute. Pentru a liza complet celulele, balonul trebuie agitat frecvent.
5. După liză, folosiți o racletă curată pentru a răzui celulele de pe o parte a balonului de cultură (acțiunea ar trebui să fie rapidă), apoi utilizați un pistol pentru a muta resturile celulare și a lizat într-un tub de centrifugă de 1,5 ml. (Întreaga operațiune ar trebui făcută pe gheață cât mai mult posibil.)
6. Se centrifugă la 12000 rpm la 4°C timp de 5 minute. (Porniți centrifuga în avans pentru a pre-răci)
7. Transferați supernatantul centrifugat într-un tub de centrifugă timp de 0,5 minute și depozitați-l la -20°C. , celule HEK 293, celule CAR-T, celule CHO, celule de insecte etc.
Cell culture flasksBaloane de cultură celulară
The FAI climbed 5.9 percent year-on-year in the first 11 months of 2018, quickening from the 5.7-percent growth in Jan-Oct, the National Bureau of Statistics (NBS) said Friday in an online statement.
The key indicator of investment, dubbed a major growth driver, hit the bottom in August and has since started to rebound steadily.
In the face of emerging economic challenges home and abroad, China has stepped up efforts to stabilize investment, in particular rolling out measures to motivate private investors and channel funds into infrastructure.
Friday's data showed private investment, accounting for more than 60 percent of the total FAI, expanded by a brisk 8.7 percent.
NBS spokesperson Mao Shengyong said funds into weak economic links registered rapid increases as investment in environmental protection and agriculture jumped 42 percent and 12.5 percent respectively, much faster than the average.
In breakdown, investment in high-tech and equipment manufacturing remained vigorous with 16.1-percent and 11.6-percent increases respectively in the first 11 months. Infrastructure investment gained 3.7 percent, staying flat. Investment in property development rose 9.7 percent, also unchanged.