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Materiais e Métodos
3.1. Shake Flask Cultivations
Pré-culturas de células de suspensão MDCK.SUS2 foram cultivadas em shaker flasks (frascos Erlenmeyer de policarbonato de 125 mL, #431143, Corning®, cidade de Nova York, NY, EUA) com 50 mL de volume de trabalho (wv) , em uma incubadora Multitron Pro (Infors HT, Bottmingen, Suíça) a 37°C e 5% de atmosfera de CO2 com uma frequência de agitação de 180 rpm. As células foram passadas a cada 3-4 dias com uma densidade de semeadura de 0,5-0,8 × 106 células/mL.
IAV A/Puerto Rico/8/34 (H1N1) vírus semente foi usado para infecção, gerado em células MDCK aderentes (ECACC # 84121903). O vírus da semente tinha um título de 1,1 × 109 TCID50/mL. As células foram cultivadas em um meio quimicamente definido, sem proteínas e sem componentes animais, Smif8 (Smif8 PGD 2×, suplementado com 5 mM de glutamina e 8 mM de piruvato), desenvolvido especificamente para o cultivo de células MDCK em suspensão [95].
Experimentos de crescimento e infecção para validação do modelo foram realizados usando frascos de agitação de 500 mL (#4113-0500, Nalgene™, Thermo Scientific, Waltham, MA, EUA) com volume inicial de cultivo de 200 mL a 150 rpm. Dois cultivos foram realizados, uma infecção simulada (Cultivo 1), onde as células cresceram por cerca de 200 h, e uma infecção (Cultivo 2), onde as células foram infectadas com IAV em cerca de 49 h após a inoculação. Para conseguir uma infecção síncrona da população de células, foi utilizado um moi = 10. Devido à concentração relativamente baixa de células no momento da infecção (2,1 × 106 células/mL) e à alta moi utilizada, não foi necessária a substituição do meio nem a adição de tripsina (para ativação do vírus). Em ambos os cultivos, água Milli-Q estéril foi adicionada antes da amostragem para compensar a evaporação da água (1–2 mL/dia), uma vez que o experimento foi realizado em uma incubadora não hidratada.
Fonte de:
https:/ /www.mdpi.com/2218-1989/12/3/239/htmhttps://www.mdpi.com/2218-1989/12/3/239/htm
The FAI climbed 5.9 percent year-on-year in the first 11 months of 2018, quickening from the 5.7-percent growth in Jan-Oct, the National Bureau of Statistics (NBS) said Friday in an online statement.
The key indicator of investment, dubbed a major growth driver, hit the bottom in August and has since started to rebound steadily.
In the face of emerging economic challenges home and abroad, China has stepped up efforts to stabilize investment, in particular rolling out measures to motivate private investors and channel funds into infrastructure.
Friday's data showed private investment, accounting for more than 60 percent of the total FAI, expanded by a brisk 8.7 percent.
NBS spokesperson Mao Shengyong said funds into weak economic links registered rapid increases as investment in environmental protection and agriculture jumped 42 percent and 12.5 percent respectively, much faster than the average.
In breakdown, investment in high-tech and equipment manufacturing remained vigorous with 16.1-percent and 11.6-percent increases respectively in the first 11 months. Infrastructure investment gained 3.7 percent, staying flat. Investment in property development rose 9.7 percent, also unchanged.