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A lise celular é um importante método experimental para alterar a permeabilidade e a atividade celular. Isso significa que depois que uma célula é infectada por um vírus, o vírus usa os nutrientes na célula hospedeira para sintetizar sua própria prole, e então a prole do vírus destrói a célula hospedeira e é liberada das células. Em experimentos de lise celular, cell culture flasks são consumíveis comuns. Os passos para a lise celular são os seguintes:
1. Despeje o meio de cultura e feche o frasco de cultura celular de cabeça para baixo em papel absorvente para que o papel absorvente absorva o meio de cultura (ou coloque o frasco na vertical por um tempo para permitir que o meio de cultura residual flua para o fundo do frasco e depois use uma pipeta para sugá-lo ).
2. Adicione 3ml de PBS pré-resfriado a 4℃ (0,01M pH7.2～7.3) a cada frasco de células. Coloque as células planas e agite suavemente por 1 min para lavar as células e, em seguida, descarte a solução de lavagem. Repita a operação acima duas vezes, lavando as células três vezes para lavar o fluido de cultura. Descarte o PBS e coloque o frasco de cultura no gelo.
3. Adicione 10ul de PMSF (100mM) a 1ml de tampão de lise, agite bem e coloque no gelo. (PMSF deve ser agitado até que não haja cristais antes de misturar com a solução de lise.)
4. Adicionar 400 ul de tampão de lise contendo PMSF a cada frasco de células e lise em gelo por 30 minutos. Para lisar completamente as células, o frasco deve ser agitado frequentemente.
5. Após a lise, use um raspador limpo para raspar as células em um lado do frasco de cultura (a ação deve ser rápida) e, em seguida, use uma pistola para mover os detritos celulares e o lisado para um tubo de centrífuga de 1,5 ml. (Toda a operação deve ser feita no gelo o máximo possível.)
6. Centrifugar a 12.000 rpm a 4°C por 5 min. (Ligue a centrífuga com antecedência para pré-resfriamento)
7. Transfira o sobrenadante centrifugado para um tubo de centrífuga por 0,5 min e armazene-o a -20°C.
Frascos de cultura de células não são usados apenas para experimentos de lise celular, mas também para cultura de células e tecidos de média escala em laboratório, como células Vero , células HEK 293, células CAR-T, células CHO, células de insetos, etc.
The FAI climbed 5.9 percent year-on-year in the first 11 months of 2018, quickening from the 5.7-percent growth in Jan-Oct, the National Bureau of Statistics (NBS) said Friday in an online statement.
The key indicator of investment, dubbed a major growth driver, hit the bottom in August and has since started to rebound steadily.
In the face of emerging economic challenges home and abroad, China has stepped up efforts to stabilize investment, in particular rolling out measures to motivate private investors and channel funds into infrastructure.
Friday's data showed private investment, accounting for more than 60 percent of the total FAI, expanded by a brisk 8.7 percent.
NBS spokesperson Mao Shengyong said funds into weak economic links registered rapid increases as investment in environmental protection and agriculture jumped 42 percent and 12.5 percent respectively, much faster than the average.
In breakdown, investment in high-tech and equipment manufacturing remained vigorous with 16.1-percent and 11.6-percent increases respectively in the first 11 months. Infrastructure investment gained 3.7 percent, staying flat. Investment in property development rose 9.7 percent, also unchanged.