English
Materiały i metody
3.1. Hodowle w kolbach wstrząśniętych
Prekultury zawiesinowych komórek MDCK.SUS2 hodowano w kolby z wytrząsaniem (kolby Erlenmeyera o pojemności 125 ml z poliwęglanu, #431143, Corning®, Nowy Jork, NY, USA) o objętości roboczej 50 ml (wag.) , w inkubatorze Multitron Pro (Infors HT, Bottmingen, Szwajcaria) w 37 °C i atmosferze 5% CO2 przy częstotliwości wytrząsania 180 obr./min. Komórki pasażowano co 3–4 dni z gęstością wysiewu 0,5–0,8 × 106 komórek/ml.
IAV A/Puerto Rico/8/34 (H1N1) do zakażenia użyto wirusa nasion, wygenerowany w przylegających komórkach MDCK (ECACC # 84121903). Wirus nasienny miał miano 1,1 × 109 TCID50/ml.
Komórki hodowano w chemicznie zdefiniowanej, wolnej od białka i składników zwierzęcych pożywce, Smif8 (Smif8 PGD 2x, uzupełnionej 5 mM glutaminą i 8 mM pirogronianu), specjalnie opracowany do hodowli zawiesinowych komórek MDCK [95].
Eksperymenty dotyczące wzrostu i infekcji w celu walidacji modelu przeprowadzono przy użyciu 500 ml wytrząsanych kolb (#4113-0500, Nalgene™, Thermo Scientific, Waltham, MA, USA) z początkową objętością hodowli 200 ml przy 150 obr./min. Przeprowadzono dwie hodowle, jedną pozorną infekcję (hodowla 1), w której komórki rosły przez około 200 godzin, i jedną infekcję (hodowla 2), w której komórki zakażono IAV około 49 godzin po inokulacji. Aby osiągnąć synchroniczną infekcję populacji komórek, zastosowano moi = 10. Ze względu na stosunkowo niskie stężenie komórek w czasie infekcji (2,1 × 106 komórek/ml) i zastosowany wysoki poziom moi, nie była konieczna ani wymiana pożywki, ani dodanie trypsyny (w celu aktywacji wirusa). W obu hodowlach przed pobraniem próbek dodawano sterylną wodę Milli-Q, aby skompensować parowanie wody (1–2 ml/dzień), ponieważ doświadczenie przeprowadzono w nienawodnionym inkubatorze.
Źródło: https:/ /www.mdpi.com/2218-1989/12/3/239/htm
The FAI climbed 5.9 percent year-on-year in the first 11 months of 2018, quickening from the 5.7-percent growth in Jan-Oct, the National Bureau of Statistics (NBS) said Friday in an online statement.
The key indicator of investment, dubbed a major growth driver, hit the bottom in August and has since started to rebound steadily.
In the face of emerging economic challenges home and abroad, China has stepped up efforts to stabilize investment, in particular rolling out measures to motivate private investors and channel funds into infrastructure.
Friday's data showed private investment, accounting for more than 60 percent of the total FAI, expanded by a brisk 8.7 percent.
NBS spokesperson Mao Shengyong said funds into weak economic links registered rapid increases as investment in environmental protection and agriculture jumped 42 percent and 12.5 percent respectively, much faster than the average.
In breakdown, investment in high-tech and equipment manufacturing remained vigorous with 16.1-percent and 11.6-percent increases respectively in the first 11 months. Infrastructure investment gained 3.7 percent, staying flat. Investment in property development rose 9.7 percent, also unchanged.