English
Bakterie lizogenne odnoszą się do bakterii, które mają profagi zintegrowane na swoich chromosomach i mogą normalnie rosnąć i rozmnażać się bez lizy. Łagodne bakteriofagi są szeroko stosowane w dziedzinie transdukcji, wektorów inżynierii genetycznej i biologii molekularnej. kolba do hodowli komórek może być użyty do sprawdzenia lizogenności bakterii. Konkretna metoda działania jest następująca:
1. Hodowla bakterii lizogennych: Zaszczepić E. coli 225 (λ) aktywowaną przez nachylenie LB do 250 ml kolby do hodowli komórkowej zawierającej 20 ml roztworu hodowli LB, hodować z wytrząsaniem w 30°C przez 16 godzin, a następnie pobrać z niej 2 ml zawiesiny bakteryjnej i podłączyć do drugiego W 250ml kolbie Erlenmeyera zawierającej 20ml bulionu LB, hodować z wytrząsaniem w 37°C przez 2h do fazy logarytmicznej.
2. Wyklucz wolnego faga: Jeśli testowanym szczepem jest Bacillus, można z niego zrobić zawiesinę zarodników, a następnie poddawać działaniu temperatury 80°C przez 10 minut w celu zabicia faga, który może być zaadsorbowany i wolny na powierzchni bakterii lizogennych; jeśli testowany szczep nie jest Bacillus, użyj antysurowicy przygotowanej przez faga lub 0,2% roztwór cytrynianu sodu do przemycia logarytmicznych komórek lizogenu w celu usunięcia zaadsorbowanych na powierzchni i wolnych fagów. Po wirowaniu przy 4000r/min przez 10 minut, do supernatantu można dodać wrażliwe bakterie wskaźnikowe w celu oznaczenia na płytce dwuwarstwowej, która służy do testowania wolnego faga w próbce oraz faga adsorbującego bakterie lizogenne. Fag po odwirowaniu Komórki są indukowane.
3. Indukcja bakterii lizogennych: bakterie zebrane po odwirowaniu są dwukrotnie przemywane sterylną normalną solą fizjologiczną i doprowadzane do końcowego stężenia 1011 komórek/ml roztworem soli fizjologicznej lub 100mmol/l buforu Tris-HCL (pH 7,0) W przypadku zawiesiny bakteryjnej dodać 5ml zawiesiny bakteryjnej do każdej szalki, napromieniować lampą UV 30W z odległości 30cm przez 30s, natychmiast dodać 5ml roztworu hodowli LB o podwójnym stężeniu, dobrze wymieszać i inkubować w ciemności w 37°C przez 2h.
4. Badanie szczepów lizogennych: Postępować zgodnie z metodą dwuwarstwowego agaru, dodać kilka kropli chloroformu do indukowanego powyżej lizatu i odpowiednio rozcieńczyć metodą 10-krotnego rozcieńczenia. Po wybraniu trzech rozcieńczeń z rozcieńczenia, weź 0,3 ml na każde rozcieńczenie. Dobrze wymieszać z 0,2 ml zawiesiny bakterii E. coli 226 wrażliwych na fazę logarytmiczną, następnie dodać roztopioną i schłodzoną do 45°C pożywkę półkorpusu LB, natychmiast wymieszać, a następnie wylać na płytkę z pożywką stałą LB. Po zestaleniu 37 Inkubować w ℃ przez 6h i obserwować. Jeśli na płytce z hodowlą pojawi się duża liczba łysinek, świadczy to o tym, że testowany szczep jest lizogenem.
Aby sprawdzić, czy bakterie wykazują lizogenność, wykonaj powyższe kroki. Zwróć uwagę na sterylność procesu podczas pracy, aby uniknąć niewłaściwej obsługi, która ma wpływ na wyniki testu.
The FAI climbed 5.9 percent year-on-year in the first 11 months of 2018, quickening from the 5.7-percent growth in Jan-Oct, the National Bureau of Statistics (NBS) said Friday in an online statement.
The key indicator of investment, dubbed a major growth driver, hit the bottom in August and has since started to rebound steadily.
In the face of emerging economic challenges home and abroad, China has stepped up efforts to stabilize investment, in particular rolling out measures to motivate private investors and channel funds into infrastructure.
Friday's data showed private investment, accounting for more than 60 percent of the total FAI, expanded by a brisk 8.7 percent.
NBS spokesperson Mao Shengyong said funds into weak economic links registered rapid increases as investment in environmental protection and agriculture jumped 42 percent and 12.5 percent respectively, much faster than the average.
In breakdown, investment in high-tech and equipment manufacturing remained vigorous with 16.1-percent and 11.6-percent increases respectively in the first 11 months. Infrastructure investment gained 3.7 percent, staying flat. Investment in property development rose 9.7 percent, also unchanged.