English
Liza komórek to ważna eksperymentalna metoda zmiany przepuszczalności i aktywności komórek. Oznacza to, że po zakażeniu komórki wirusem, wirus wykorzystuje składniki odżywcze komórki gospodarza do syntezy własnego potomstwa, a następnie potomstwo wirusa niszczy komórkę gospodarza i jest uwalniane z komórek. W eksperymentach z lizą komórek kolby do hodowli komórek są powszechnym materiałem eksploatacyjnym. Etapy lizy komórek są następujące:
1. Wylej pożywkę i zapnij butelkę z kulturą komórkową do góry nogami na papierze absorpcyjnym, aby papier absorpcyjny wchłonął pożywkę (lub umieść butelkę pionowo na chwilę, aby umożliwić spłynięcie resztek pożywki na dno butelki a następnie użyj pipety, aby go odessać ).
2. Dodaj 3 ml 4 ℃ wstępnie schłodzonego PBS (0,01M pH 7,2～7,3) do każdej butelki z ogniwami. Połóż komórki płasko i delikatnie wstrząsaj przez 1 minutę, aby przemyć komórki, a następnie wylej roztwór do płukania. Powtórz powyższą operację dwukrotnie, przemywając komórki trzy razy, aby wypłukać płyn hodowlany. Wyrzuć PBS i umieść kolbę z kulturą w lodzie.
3. Dodaj 10ul PMSF (100mM) do 1ml buforu do lizy, dobrze wstrząśnij i umieść na lodzie. (PMSF należy wstrząsać, aż znikną kryształy przed zmieszaniem z roztworem do lizy).
4. Dodaj 400 ul buforu do lizy zawierającego PMSF do każdej kolby z komórkami i lizuj na lodzie przez 30 minut. W celu pełnej lizy komórek, kolbę należy często wstrząsać.
5. Po lizie użyj czystej skrobaczki, aby zeskrobać komórki z jednej strony kolby hodowlanej (działanie powinno być szybkie), a następnie za pomocą pistoletu przenieś szczątki komórek i lizat do 1,5 ml probówki wirówkowej. (Cała operacja powinna być wykonywana na lodzie tak bardzo, jak to możliwe.)
6. Wirować przy 12000 obr./min w 4°C przez 5 min. (wcześniej włącz wirówkę w celu wstępnego schłodzenia)
7. Przenieś odwirowany supernatant do probówki do wirowania na 0,5 minuty i przechowuj w temperaturze -20°C.
Naczynia do hodowli komórkowych są używane nie tylko do eksperymentów z lizą komórek, ale także do hodowli komórkowych i tkankowych na średnią skalę w laboratorium, takich jak komórki Vero , komórki HEK 293, komórki CAR-T, komórki CHO, komórki owadzie itp.
The FAI climbed 5.9 percent year-on-year in the first 11 months of 2018, quickening from the 5.7-percent growth in Jan-Oct, the National Bureau of Statistics (NBS) said Friday in an online statement.
The key indicator of investment, dubbed a major growth driver, hit the bottom in August and has since started to rebound steadily.
In the face of emerging economic challenges home and abroad, China has stepped up efforts to stabilize investment, in particular rolling out measures to motivate private investors and channel funds into infrastructure.
Friday's data showed private investment, accounting for more than 60 percent of the total FAI, expanded by a brisk 8.7 percent.
NBS spokesperson Mao Shengyong said funds into weak economic links registered rapid increases as investment in environmental protection and agriculture jumped 42 percent and 12.5 percent respectively, much faster than the average.
In breakdown, investment in high-tech and equipment manufacturing remained vigorous with 16.1-percent and 11.6-percent increases respectively in the first 11 months. Infrastructure investment gained 3.7 percent, staying flat. Investment in property development rose 9.7 percent, also unchanged.