English
Cellysis is een belangrijke experimentele methode om de permeabiliteit en activiteit van cellen te veranderen. Het betekent dat nadat een cel is geïnfecteerd door een virus, het virus de voedingsstoffen in de gastheercel gebruikt om zijn eigen nageslacht te synthetiseren, waarna het nageslacht van het virus de gastheercel vernietigt en uit de cellen wordt vrijgelaten. Bij cellysisexperimenten zijn celkweekflessen een veelvoorkomend verbruiksartikel. De stappen voor cellysis zijn als volgt:
1. Giet het kweekmedium uit, en gesp de celkweekfles ondersteboven op absorberend papier zodat het absorberende papier het kweekmedium opneemt (of zet de fles even rechtop zodat het resterende kweekmedium naar de bodem van de fles kan vloeien en gebruik dan een pipet om het weg te zuigen ).
2. Voeg 3ml van 4℃ voorgekoelde PBS (0.01M pH7.2~7.3) toe aan elke fles cellen. Leg de cellen plat en schud zachtjes gedurende 1 minuut om de cellen te wassen en gooi de wasoplossing weg. Herhaal de bovenstaande handeling twee keer en was de cellen drie keer om de kweekvloeistof weg te spoelen. Gooi de PBS weg en plaats de kweekkolf op ijs.
3. Voeg 10 µl PMSF (100 mM) toe aan 1 ml lysisbuffer, schud goed en plaats op ijs. (PMSF moet worden geschud totdat er geen kristallen meer zijn voordat het wordt gemengd met de lysisoplossing.)
4. Voeg 400 µl lysisbuffer met PMSF toe aan elke kolf met cellen en lyseer gedurende 30 minuten op ijs. Om de cellen volledig te lyseren, moet de kolf regelmatig worden geschud.
5. Gebruik na lysis een schone schraper om de cellen aan één kant van de kweekfles te schrapen (de actie moet snel zijn) en gebruik vervolgens een pistool om de celresten en het lysaat naar een centrifugebuis van 1,5 ml te verplaatsen. (De hele operatie moet zoveel mogelijk op ijs worden uitgevoerd.)
6. Centrifugeer bij 12000 rpm bij 4°C gedurende 5 min. (Zet de centrifuge van tevoren aan om voor te koelen)
7. Breng het gecentrifugeerde supernatant gedurende 0,5 min over in een centrifugebuis en bewaar het bij -20°C.
Celkweekflessen worden niet alleen gebruikt voor cellysisexperimenten, maar ook voor middelgrote cel- en weefselkweek in het laboratorium, zoals Vero-cellen , HEK 293-cellen, CAR-T-cellen, CHO-cellen, insectencellen, etc.
The FAI climbed 5.9 percent year-on-year in the first 11 months of 2018, quickening from the 5.7-percent growth in Jan-Oct, the National Bureau of Statistics (NBS) said Friday in an online statement.
The key indicator of investment, dubbed a major growth driver, hit the bottom in August and has since started to rebound steadily.
In the face of emerging economic challenges home and abroad, China has stepped up efforts to stabilize investment, in particular rolling out measures to motivate private investors and channel funds into infrastructure.
Friday's data showed private investment, accounting for more than 60 percent of the total FAI, expanded by a brisk 8.7 percent.
NBS spokesperson Mao Shengyong said funds into weak economic links registered rapid increases as investment in environmental protection and agriculture jumped 42 percent and 12.5 percent respectively, much faster than the average.
In breakdown, investment in high-tech and equipment manufacturing remained vigorous with 16.1-percent and 11.6-percent increases respectively in the first 11 months. Infrastructure investment gained 3.7 percent, staying flat. Investment in property development rose 9.7 percent, also unchanged.