Kā izmantot šūnu kultūras kolbas E. coli koloniju noteikšanai

Wed May 18 11:46:34 CST 2022

Koliformas baktērijas attiecas uz gramnegatīvu ne-bacillus baktēriju grupu, kas var fermentēt laktozi, ražot skābi un gāzi, aerobos un fakultatīvi anaerobos. Praktiski to bieži izmanto kā indikatoru, kas norāda, vai pārtika ir piesārņota ar fekālijām. No visām noteikšanas metodēm šūnu kultūras kolbas noteikšanai tiek izmantota biežāk. Darbības soļi ir šādi:

1. Paraugu ņemšana un atšķaidīšana

(1) Saskaņā ar aseptisko metodi ievietojiet 25 g (vai 25 ml) testa parauga šūnu kultūras kolbā, kurā ir 225 ml sterila ūdens (kolbā iepriekš iestatīts atbilstošs stikla lodīšu skaits) vai sterilizētā javā, un kārtīgi sakratiet. Vai sasmalciniet, lai iegūtu vienmērīgu atšķaidījumu attiecībā 1:10. Vislabāk ir izmantot sterilu homogenizatoru cietiem paraugiem un centrifugēt ar ātrumu 800010000 apgr./min 1 minūti, lai pagatavotu 1:10 atšķaidījumu.

(2) Izmantojiet 1 ml sterilu salmiņu. lai iesūktu 1 ml 1:10 atšķaidījuma, ielej to mēģenē, kurā ir 9 ml sterila ūdens, sakrata un samaisa, lai iegūtu 1:100 atšķaidījumu, aizstātu ar 1 ml sterilu salmiņu, nospiediet Iepriekš minētās darbības secīgi veic 10 reizes sērijveida atšķaidījumus. .

(3) Atbilstoši pārtikas higiēnas prasībām vai testa paraugu piesārņojuma aplēsēm izvēlieties trīs atšķaidījumus un katram atšķaidījumam inokulē 3 mēģenes. To var arī inokulēt tieši ar paraugu.

2. Sākotnējais laktozes fermentācijas tests

To parasti sauc par hipotētisku testēšanu. Tās mērķis ir pārbaudīt, vai paraugā nav baktēriju, kas fermentē laktozi, lai ražotu gāzi. Pārbaudāmo paraugu inokulē laktozes žultssāls fermentācijas mēģenē, dubultlaktozes žultssāls fermentācijas cauruli izmanto inokulātam virs 1 ml; viena laktozes žults sāls fermentācijas caurule tiek izmantota 1 ml un mazāk nekā 1 ml. Katram atšķaidījumam inokulē 3 mēģenes un ievietojiet tās 36±1℃ inkubatorā uz 24±2h. Ja visas laktozes žults sāls fermentācijas caurules nerada gāzi, to var ziņot kā negatīvu attiecībā uz koliformām baktērijām. Ja rodas gāze, izpildiet tālāk norādīto procedūru.

3. Atdalīšanas kultūra

Gāzi veidojošās fermentācijas mēģenes tika izsvītrotas un inokulētas uz eozīna metilēnzilā agara plāksnēm un kultivētas inkubatorā 36 ± 1 °C temperatūrā 18-24 stundas. Pēc tam tika novērota koloniju morfoloģija un veikta Grama krāsošana, mikroskopiskā izmeklēšana un atkārtotas fermentācijas tests.

How to use cell culture flasks to detect E. coli colonies

4. Laktozes dubultās fermentācijas tests

Tā sauktais apstiprinājuma tests, kura mērķis ir pierādīt, ka gramnegatīvās ne-bacillus baktērijas, kas izdalītas no mēģenes, kas bija pozitīvas sākotnējā laktozes fermentācijas testā, patiešām var fermentēt laktozi, lai radītu gāzi. Iepriekš minētajā selektīvajā EMB barotnē atlasiet 1 līdz 2 aizdomīgas koliformas kolonijas Grama krāsošanai un vienlaikus inokulē laktozes fermentācijas mēģenes un ievietojiet tās 36±l°C inkubatorā uz 24±2 stundām, lai novērotu gāzi. ražošanu. . Ja laktozes fermentācijas caurule rada gāzi un gramu traips ir negatīvs, baktērijām, kas nesatur bacilus, tiek ziņots par koliformām pozitīvām; ja laktozes fermentācijas caurule nerada gāzi vai gramu traips ir pozitīvs, tas tiek ziņots kā negatīvs attiecībā uz koliformām.

Iepriekš ir norādīta darbības metode šūnu kultūras kolbas, lai noteiktu E. coli grupas indikatorus. Escherichia coli ir svarīgs rādītājs, kas atspoguļo, vai pārtika ir piesārņota. Noteikšanas metodes apguve ir pamatprasme, kas ir jābūt katram pārtikas inspektoram.

The FAI climbed 5.9 percent year-on-year in the first 11 months of 2018, quickening from the 5.7-percent growth in Jan-Oct, the National Bureau of Statistics (NBS) said Friday in an online statement.

The key indicator of investment, dubbed a major growth driver, hit the bottom in August and has since started to rebound steadily.

In the face of emerging economic challenges home and abroad, China has stepped up efforts to stabilize investment, in particular rolling out measures to motivate private investors and channel funds into infrastructure.

Friday's data showed private investment, accounting for more than 60 percent of the total FAI, expanded by a brisk 8.7 percent.

NBS spokesperson Mao Shengyong said funds into weak economic links registered rapid increases as investment in environmental protection and agriculture jumped 42 percent and 12.5 percent respectively, much faster than the average.

In breakdown, investment in high-tech and equipment manufacturing remained vigorous with 16.1-percent and 11.6-percent increases respectively in the first 11 months. Infrastructure investment gained 3.7 percent, staying flat. Investment in property development rose 9.7 percent, also unchanged.