English
Lizogēnās baktērijas attiecas uz baktērijām, kuru hromosomās ir integrēti profāgi un kuras var normāli augt un vairoties bez lizēšanas. Vieglie bakteriofāgi ir plaši izmantoti transdukcijas, gēnu inženierijas vektoru un molekulārās bioloģijas jomās. šūnu kultūras kolba var izmantot, lai pārbaudītu baktēriju lizogenitāti. Konkrētā darbības metode ir šāda:
1. Lizogēno baktēriju kultivēšana: Inokulēt ar LB slīpumu aktivizēto E. coli 225 (λ) 250 ml šūnu kultūras kolbā, kurā ir 20 ml LB kultūras šķīduma, kultivējiet ar kratīšanu 30 °C temperatūrā 16 stundas un pēc tam paņemiet no tās 2 ml baktēriju suspensijas un savienojiet to ar citu 250 ml Erlenmeijera kolbā, kas satur 20 ml LB buljona, kultivējiet, kratot 37°C 2 stundas līdz logaritmiskajai fāzei.
2. Izslēgt brīvo fāgu: ja pārbaudāmais celms ir Bacillus, to var pagatavot sporu suspensijā un pēc tam 10 minūtes apstrādāt 80°C temperatūrā, lai iznīcinātu fāgu, kas var būt adsorbēts un brīvs uz lizogēno baktēriju virsmas; ja pārbaudāmais celms nav Bacillus, izmantojiet antiserumu, kas sagatavots ar fāgu vai 0,2% nātrija citrāta šķīdumu, lai mazgātu logaritmiskās fāzes lizogēna šūnas, lai noņemtu uz virsmas adsorbēto un brīvo fāgu. Pēc centrifugēšanas ar ātrumu 4000 apgr./min 10 minūtes, supernatantu var pievienot ar jutīgām indikatorbaktērijām divslāņu plāksnes noteikšanai, ko izmanto, lai pārbaudītu parauga brīvo fāgu un fāgu, kas adsorbē lizogēnās baktērijas. Fāgs pēc centrifugēšanas Šūnas tiek inducētas.
3. Lizogēno baktēriju indukcija: baktērijas, kas savāktas pēc centrifugēšanas, divas reizes mazgā ar sterilu parasto fizioloģisko šķīdumu un iegūst galīgo koncentrāciju 1011 šūnas/ml ar parasto fizioloģisko šķīdumu vai 100 mmol/l Tris-HCL buferšķīdumu (pH7,0). Baktēriju suspensijai pievienojiet 5 ml baktēriju suspensijas katrā trauciņā, 30s apstaro ar 30W UV lampu 30cm attālumā, nekavējoties pievieno 5ml dubultās koncentrācijas LB kultūras šķīduma, labi samaisa un inkubē tumsā 37°C 2h.
4. Lizogēno celmu pārbaude: darbojas saskaņā ar divslāņu agara metodi, iepriekš inducētajam lizātam pievieno dažus pilienus hloroforma un atbilstoši atšķaida ar 10-kārtīgas atšķaidīšanas metodi. Pēc trīs atšķaidījumu atlases katram atšķaidījumam ņemiet 0,3 ml. Labi samaisiet ar 0,2 ml logaritmisko fāzi jutīgas E. coli 226 baktēriju suspensijas, pēc tam pievienojiet LB pusķermeņa barotni, kas ir izkususi un atdzesēta līdz 45°C, nekavējoties samaisiet un pēc tam uzlejiet uz LB cietās barotnes plāksnes. Pēc sacietēšanas 37 Inkubējiet ℃ 6 stundas un novērojiet. Ja uz kultivētās plāksnes parādās liels skaits aplikumu, tas pierāda, ka pārbaudītais celms ir lizogēns.
Lai pārbaudītu, vai baktērijām ir lizogenitāte, veiciet iepriekš minētās darbības. Darbības laikā pievērsiet uzmanību procesa sterilitātei, lai izvairītos no nepareizas darbības, kas ietekmē testa rezultātus.
The FAI climbed 5.9 percent year-on-year in the first 11 months of 2018, quickening from the 5.7-percent growth in Jan-Oct, the National Bureau of Statistics (NBS) said Friday in an online statement.
The key indicator of investment, dubbed a major growth driver, hit the bottom in August and has since started to rebound steadily.
In the face of emerging economic challenges home and abroad, China has stepped up efforts to stabilize investment, in particular rolling out measures to motivate private investors and channel funds into infrastructure.
Friday's data showed private investment, accounting for more than 60 percent of the total FAI, expanded by a brisk 8.7 percent.
NBS spokesperson Mao Shengyong said funds into weak economic links registered rapid increases as investment in environmental protection and agriculture jumped 42 percent and 12.5 percent respectively, much faster than the average.
In breakdown, investment in high-tech and equipment manufacturing remained vigorous with 16.1-percent and 11.6-percent increases respectively in the first 11 months. Infrastructure investment gained 3.7 percent, staying flat. Investment in property development rose 9.7 percent, also unchanged.