English
Šūnu līze ir svarīga eksperimentāla metode, lai mainītu šūnu caurlaidību un aktivitāti. Tas nozīmē, ka pēc tam, kad šūna ir inficēta ar vīrusu, vīruss izmanto saimniekšūnā esošās barības vielas, lai sintezētu savu pēcnācēju, un pēc tam vīrusa pēcnācējs iznīcina saimniekšūnu un tiek atbrīvots no šūnām. Šūnu līzes eksperimentos šūnu kultūras kolbas ir izplatīts palīgmateriāls. Šūnu līzes soļi ir šādi:
1. Izlejiet barotni un piesprādzējiet šūnu kultūras pudeli otrādi uz absorbējoša papīra, lai absorbējošais papīrs absorbētu barotni (vai uz brīdi novietojiet pudeli vertikāli, lai barotnes atlikums varētu plūst pudeles apakšā un pēc tam izmantojiet pipeti, lai to izsūktu ).
2. Katrai šūnu pudelei pievienojiet 3 ml 4 ℃ iepriekš atdzesēta PBS (0,01 M pH 7,2～7,3). Novietojiet šūnas plakaniski un viegli sakratiet 1 minūti, lai šūnas nomazgātu, un pēc tam izmetiet mazgāšanas šķīdumu. Atkārtojiet iepriekš minēto darbību divas reizes, trīs reizes mazgājot šūnas, lai noskalotu kultūras šķidrumu. Izmetiet PBS un novietojiet kultivēšanas kolbu uz ledus.
3. Pievienojiet 10 ul PMSF (100 mM) 1 ml līzes buferšķīdumam, labi sakratiet un novietojiet uz ledus. (Pirms sajaukšanas ar līzes šķīdumu PMSF jāsakrata, līdz vairs nav kristālu.)
4. Katrai šūnu kolbai pievieno 400 ul līzes buferšķīduma, kas satur PMSF, un lizē uz ledus 30 minūtes. Lai šūnas pilnībā izlizētu, kolba ir bieži jākrata.
5. Pēc līzes izmantojiet tīru skrāpi, lai nokasītu šūnas vienā kultivēšanas kolbas pusē (darbībai jābūt ātrai), un pēc tam izmantojiet pistoli, lai pārvietotu šūnu atliekas un lizātu 1,5 ml centrifūgas mēģenē. (Visa darbība pēc iespējas jāveic uz ledus.)
6. Centrifugējiet pie 12000 apgr./min 4°C 5 minūtes. (Iepriekš ieslēdziet centrifūgu, lai to atdzesētu)
7. Centrifugēto supernatantu 0,5 minūtes pārnes centrifūgas mēģenē un uzglabā -20°C.
Šūnu kultūras kolbas izmanto ne tikai šūnu līzes eksperimentiem, bet arī vidēja mēroga šūnu un audu kultūrai laboratorijā, piemēram, Vero šūnās. , HEK 293 šūnas, CAR-T šūnas, CHO šūnas, kukaiņu šūnas utt.
The FAI climbed 5.9 percent year-on-year in the first 11 months of 2018, quickening from the 5.7-percent growth in Jan-Oct, the National Bureau of Statistics (NBS) said Friday in an online statement.
The key indicator of investment, dubbed a major growth driver, hit the bottom in August and has since started to rebound steadily.
In the face of emerging economic challenges home and abroad, China has stepped up efforts to stabilize investment, in particular rolling out measures to motivate private investors and channel funds into infrastructure.
Friday's data showed private investment, accounting for more than 60 percent of the total FAI, expanded by a brisk 8.7 percent.
NBS spokesperson Mao Shengyong said funds into weak economic links registered rapid increases as investment in environmental protection and agriculture jumped 42 percent and 12.5 percent respectively, much faster than the average.
In breakdown, investment in high-tech and equipment manufacturing remained vigorous with 16.1-percent and 11.6-percent increases respectively in the first 11 months. Infrastructure investment gained 3.7 percent, staying flat. Investment in property development rose 9.7 percent, also unchanged.