溶原性細菌の検査における細胞培養フラスコの適用

Wed May 18 17:14:33 CST 2022

溶原性細菌とは、染色体にプロファージが組み込まれていて、溶解せずに正常に増殖および繁殖できる細菌を指します。軽度のバクテリオファージは、形質導入、遺伝子工学ベクター、および分子生物学の分野で広く使用されています。 細胞培養フラスコは、細菌の溶原性をチェックするために使用できます。具体的な操作方法は以下の通りです:

1。溶原性細菌の培養:LBスロープによって活性化されたE.coli 225(λ)を20mlのLB培養液を含む250mlの細胞培養フラスコに接種し、30°Cで16時間振とうしながら培養し、そこから2mlの細菌懸濁液を取り出します。別のものに接続します。20mlのLBブロスを含む250mlの三角フラスコで、37°C​​で2時間振とうしながら対数増殖期まで培養します。

2。遊離ファージを除外する:試験する菌株がバチルスの場合、胞子懸濁液にし、80°Cで10分間処理して、溶原性細菌の表面に吸着して遊離する可能性のあるファージを死滅させることができます。試験する菌株が非バチルスの場合は、ファージまたは0.2%クエン酸ナトリウム溶液で調製した抗血清を使用して対数増殖期の溶原細胞を洗浄し、表面に吸着した遊離ファージを除去します。 4000r / minで10分間遠心分離した後、上澄みに高感度インジケーターバクテリアを添加して、サンプルの遊離ファージと溶原性バクテリアを吸着するファージをテストするために使用される二重層プレート測定を行うことができます。遠心分離後のファージ細胞が誘導されます。

Application of cell culture flasks in the examination of lysogenic bacteria

3。溶原性細菌の誘導:遠心分離後に収集した細菌を滅菌生理食塩水で2回洗浄し、通常の生理食塩水または100mmol / l Tris-HCLバッファー(pH7.0)で最終濃度を1011細胞/mlにします。各皿に5mlの細菌懸濁液を30cmの距離で30WのUVランプで30秒間照射し、すぐに5mlの2濃縮LB培養液を加え、よく混合し、37℃で2時間暗所でインキュベートします。

4.4。溶原性菌株の検査:二層寒天法に従って操作し、上記の誘導溶解物にクロロホルムを数滴加え、10倍希釈法で適切に希釈します。希釈液の3つの希釈液を選択した後、各希釈液に0.3mlを取ります。 0.2mlの対数相感受性大腸菌226細菌懸濁液とよく混合し、次に溶解して45°Cに冷却したLB半体培地を加え、すぐに混合してから、LB固体培地プレートに注ぎます。凝固後、37℃で6時間インキュベートして観察します。培養板に多数のプラークが出現する場合は、試験菌が溶原菌であることを証明しています。

菌が溶菌性を持っているかどうかを確認するには、上記の手順に従ってください。テスト結果に影響を与える不適切な操作を避けるために、操作中のプロセスの無菌性に注意してください。

The FAI climbed 5.9 percent year-on-year in the first 11 months of 2018, quickening from the 5.7-percent growth in Jan-Oct, the National Bureau of Statistics (NBS) said Friday in an online statement.

The key indicator of investment, dubbed a major growth driver, hit the bottom in August and has since started to rebound steadily.

In the face of emerging economic challenges home and abroad, China has stepped up efforts to stabilize investment, in particular rolling out measures to motivate private investors and channel funds into infrastructure.

Friday's data showed private investment, accounting for more than 60 percent of the total FAI, expanded by a brisk 8.7 percent.

NBS spokesperson Mao Shengyong said funds into weak economic links registered rapid increases as investment in environmental protection and agriculture jumped 42 percent and 12.5 percent respectively, much faster than the average.

In breakdown, investment in high-tech and equipment manufacturing remained vigorous with 16.1-percent and 11.6-percent increases respectively in the first 11 months. Infrastructure investment gained 3.7 percent, staying flat. Investment in property development rose 9.7 percent, also unchanged.