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La sottocultura si riferisce al processo di divisione della coltura in piccole parti, re-inoculandole in un altro recipiente di coltura (bottiglia) e quindi coltura. Falconi per colture cellulari sono materiali di consumo comunemente usati durante la coltivazione delle cellule. Quindi, come subcoltivare le cellule nel pallone?
Generalmente, le cellule nei recipienti per colture cellulari crescono in un denso monostrato e sono fondamentalmente sature. Per consentire alle cellule di continuare a riprodursi ed espandere il numero di cellule, è necessario effettuare operazioni di passaggio. Le cellule sospese possono essere separate direttamente, mentre le cellule aderenti devono essere digerite prima di poter essere separate. Generalmente, gli enzimi proteolitici (come la tripsina) vengono utilizzati per digerire le cellule aderenti in singole cellule. L'acido etilendiamminotetraacetico (EDTA) può anche essere aggiunto per migliorare la digestione. Osservare le cellule fino a quando le cellule diventano rotonde e si staccano dalla parete della bottiglia. Questo processo richiede spesso 5-15 minuti. Per evitare la formazione di grumi di cellule, non toccare le fiasche di coltura cellulare durante il processo di digestione delle cellule.
Per le cellule particolarmente difficili da digerire, è possibile aggiungere la soluzione di digestione con tripsina EDTA e posizionare le cellule a 37°C per facilitare la digestione. Dopo che le cellule sono state separate dalla parete della bottiglia, aggiungere immediatamente un terreno completo contenente siero per arrestare la digestione. Alcune proteine nel siero possono inibire il pancreas. Attività enzimatica. In generale, la centrifugazione non è necessaria. Se le cellule richiedono un terreno privo di siero o a basso contenuto di siero, centrifugare a 125000 g per 5 minuti, quindi scartare il terreno interrotto, aggiungere un nuovo terreno appropriato e mescolare delicatamente le cellule prima della sottocoltura.
Il rapporto di passaggio delle cellule è generalmente 1:2 -1:20, a seconda del tipo di cella. Nel processo di passaggio, la tripsina danneggerà la membrana cellulare di alcune cellule. È possibile utilizzare un raschietto per cellule per raschiare delicatamente le cellule, aggiungere una quantità appropriata di terreno, pipettare delicatamente per mescolare le cellule e trasferirle in un nuovo pallone di coltura.
The FAI climbed 5.9 percent year-on-year in the first 11 months of 2018, quickening from the 5.7-percent growth in Jan-Oct, the National Bureau of Statistics (NBS) said Friday in an online statement.
The key indicator of investment, dubbed a major growth driver, hit the bottom in August and has since started to rebound steadily.
In the face of emerging economic challenges home and abroad, China has stepped up efforts to stabilize investment, in particular rolling out measures to motivate private investors and channel funds into infrastructure.
Friday's data showed private investment, accounting for more than 60 percent of the total FAI, expanded by a brisk 8.7 percent.
NBS spokesperson Mao Shengyong said funds into weak economic links registered rapid increases as investment in environmental protection and agriculture jumped 42 percent and 12.5 percent respectively, much faster than the average.
In breakdown, investment in high-tech and equipment manufacturing remained vigorous with 16.1-percent and 11.6-percent increases respectively in the first 11 months. Infrastructure investment gained 3.7 percent, staying flat. Investment in property development rose 9.7 percent, also unchanged.