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La coltura cellulare è un compito molto difficile e qualsiasi negligenza nei piccoli dettagli dell'operazione può portare al fallimento dell'esperimento. Bottiglie per colture cellulari sono un tipo di contenitore di coltura utilizzato frequentemente, quindi qual è il processo di base?
Prima di tutto, prestare attenzione alla sterilità. Indipendentemente da quale tubo di liquido, prova a chiudere il coperchio il prima possibile dopo l'apertura e metti il coperchio verso l'alto. Non passare sopra i contenitori aperti durante la manipolazione. Inoltre, è meglio posizionare tutti i tipi di cose sul tavolo sterile in linea, parallela a te stesso. Cerca di non sovrapporre la parte anteriore a quella posteriore.
Tutti i reagenti consumabili utilizzati nella manipolazione cellulare sono preferibilmente specifici per colture cellulari. Generalmente, la maggior parte di essi sono materiali di consumo usa e getta.
(1) Sostituzione cellulare:
Rimuovere il terreno di coltura originale dalla piastra/flacone di coltura con una pipetta o una pipetta e aggiungere un nuovo terreno di coltura.
FuDau T75 Cell Culture Flasks
(2) Passaggio cellulare:
Prima del passaggio, osservare se le cellule sono dense e se iniziano a fondersi. Generalmente, quando la fusione raggiunge il 70-80%, si può passare. Può anche essere trasmesso prima.
In caso di cellule aderenti:
1) Rimuovere la soluzione di coltura originale dalla capsula/flacone di Petri con un puntale per pipetta o una pipetta;
2) Lavare con PBS o soluzione salina sterile per 3 volte (in base al volume della coltura);
3) Aggiungere una quantità appropriata di tripsina da digerire per un tempo appropriato (generalmente 0,25% di tripsina; piatto di coltura da 9 cm/10 cm e bottiglia di coltura da 25 cm, aggiungere 1 ml tripsina alla volta. Il tempo di digestione dipende dal tipo di cellula e da altre condizioni. Generalmente, se si tratta di una linea cellulare, coltura non primaria, la digestione per 1-2 minuti è sufficiente);
4) Pipettare decine di volte con la punta della pipetta (a seconda del tipo di cellula. Generalmente, la linea cellulare è 30-50 volte e di solito ci vogliono circa 2 minuti);
5) Aggiungere un volume appropriato di terreno completo per fermare la tripsinizzazione (se è una piastra di coltura da 9 cm/10 cm e una bottiglia di coltura da 25 cm, è possibile aggiungere 1 ml di terreno completo; ora ci sono 2 ml di soluzione nella bottiglia di coltura (piastra)).
6 ) La soluzione può ora essere suddivisa in fiale (2 ml). Se si tratta di una linea cellulare, dividerla direttamente in due fiaschi di coltura (piatti). Nel caso della coltura primaria, le cellule possono essere separate in base al tempo di digestione; pertanto, la soluzione (2 ml) può essere trasferita in un nuovo pallone di coltura (piatto).
FuDau T225 Cell Culture Flasks
7) Aggiungere due flaconi di coltura (piatti) con terreno di coltura completo a volume normale (se è una piastra di coltura da 9 cm/10 cm e una bottiglia di coltura da 25 cm, è un mezzo di coltura completo da 5 ml)
8) Osservare al microscopio. Le cellule appena passate non hanno aderito alla parete, sono sospese nella soluzione e sono rotonde. Generalmente, aderisce al muro entro 2 ore. Se è già aderito alla parete, avrà forme diverse a seconda del tipo di cellula, ma solitamente non è rotondo.
9) Dopo che l'osservazione al microscopio è corretta, metterlo nell'incubatore per colture cellulari. Prima di inserire la bottiglia di coltura (piatto), è possibile pulirla con alcol disinfettante.
10) Dopo la sottocoltura, è meglio cambiare il mezzo cellulare una volta il giorno successivo. Certo, può anche dipendere dalla situazione.
The FAI climbed 5.9 percent year-on-year in the first 11 months of 2018, quickening from the 5.7-percent growth in Jan-Oct, the National Bureau of Statistics (NBS) said Friday in an online statement.
The key indicator of investment, dubbed a major growth driver, hit the bottom in August and has since started to rebound steadily.
In the face of emerging economic challenges home and abroad, China has stepped up efforts to stabilize investment, in particular rolling out measures to motivate private investors and channel funds into infrastructure.
Friday's data showed private investment, accounting for more than 60 percent of the total FAI, expanded by a brisk 8.7 percent.
NBS spokesperson Mao Shengyong said funds into weak economic links registered rapid increases as investment in environmental protection and agriculture jumped 42 percent and 12.5 percent respectively, much faster than the average.
In breakdown, investment in high-tech and equipment manufacturing remained vigorous with 16.1-percent and 11.6-percent increases respectively in the first 11 months. Infrastructure investment gained 3.7 percent, staying flat. Investment in property development rose 9.7 percent, also unchanged.