English
Come strumento di coltura cellulare economico e conveniente, erlenmeyer shake flask ha una vasta gamma di applicazioni nei campi dei biofarmaci, della preparazione di vaccini, della terapia cellulare e genica, ecc. Tra questi, questo tipo di contenitore è utilizzato anche nella trasfezione di lentivirus.
I vettori lentivirali sono vettori di terapia genica sviluppati sulla base dell'HIV-1. Diverso dai vettori retrovirali generali, ha la capacità di infettare sia le cellule in divisione che quelle non in divisione ed è ampiamente utilizzato nello studio dell'espressione dell'RNAi. Il pallone di agitazione cellulare viene utilizzato principalmente nell'esperimento di trasfezione di lentivirus di cellule in sospensione. I passaggi sono i seguenti:
125ml-Erlenmeyer-Shake-Flasks
1. Aggiungere il polibrene a 6 μg/ml e una quantità adeguata di virus a 2×105/ml di cellule sospese e mescolare bene. Incubare a 37°C. Oppure centrifugare a temperatura ambiente a 150 g per 4 ore (selezionato, questo passaggio può migliorare l'efficienza di trasfezione per alcune linee cellulari difficili da trasfettare).
2. (Selezionato per questa fase per cellule sensibili alla tossicità del polibrene) Aggiungere un volume uguale di terreno fresco dopo 4 ore (o dopo la centrifugazione) per diluire il polibrene.
1000ml-Erlenmeyer-Shake-Flasks
3. Continua a coltivare per 3-4 giorni. La crescita delle cellule intermedie può essere fatta passare o il terreno può essere cambiato.
Quando si usa la fiasca agitata di Erlenmeyer per la trasfezione lentivirale, assicurarsi di usare la minor quantità possibile di terreno durante l'infezione; l'aggiunta di 5-10 ul di Polybrene (la concentrazione della soluzione madre è di 2 mg/ml) per 1 ml di terreno può migliorare l'efficienza di circa 3-5 volte. Tuttavia, il problema dell'efficienza dell'infezione da virus è relativo e puoi raggiungere i tuoi scopi di ricerca.
The FAI climbed 5.9 percent year-on-year in the first 11 months of 2018, quickening from the 5.7-percent growth in Jan-Oct, the National Bureau of Statistics (NBS) said Friday in an online statement.
The key indicator of investment, dubbed a major growth driver, hit the bottom in August and has since started to rebound steadily.
In the face of emerging economic challenges home and abroad, China has stepped up efforts to stabilize investment, in particular rolling out measures to motivate private investors and channel funds into infrastructure.
Friday's data showed private investment, accounting for more than 60 percent of the total FAI, expanded by a brisk 8.7 percent.
NBS spokesperson Mao Shengyong said funds into weak economic links registered rapid increases as investment in environmental protection and agriculture jumped 42 percent and 12.5 percent respectively, much faster than the average.
In breakdown, investment in high-tech and equipment manufacturing remained vigorous with 16.1-percent and 11.6-percent increases respectively in the first 11 months. Infrastructure investment gained 3.7 percent, staying flat. Investment in property development rose 9.7 percent, also unchanged.