English
A lizogén baktériumok olyan baktériumokra utalnak, amelyek kromoszómáiba beépültek a profágok, és normálisan tudnak növekedni és szaporodni anélkül, hogy lizálnának. Az enyhe bakteriofágokat széles körben alkalmazzák a transzdukció, a génsebészeti vektorok és a molekuláris biológia területén. A sejttenyésztő lombik a baktériumok lizogenitásának ellenőrzésére használható. A konkrét műveleti módszer a következő:
1. Lizogén baktériumok tenyésztése: Az LB lejtővel aktivált E. coli 225 (λ) törzset 20 ml LB tenyészoldatot tartalmazó 250 ml-es sejttenyésztő lombikba oltjuk, rázatással tenyésztjük 30 °C-on 16 órán át, majd vegyünk belőle 2 ml baktériumszuszpenziót és csatlakoztassa egy másikhoz. Egy 250 ml-es Erlenmeyer-lombikban, amely 20 ml LB-levest tartalmaz, tenyésztjük rázatással 37 °C-on 2 órán át a logaritmikus fázisig.
2. A szabad fág kizárása: Ha a vizsgálandó törzs Bacillus, akkor spóraszuszpenziót készíthetünk belőle, majd 80 °C-on 10 percig kezeljük, hogy elpusztítsuk a lizogén baktériumok felületén esetleg adszorbeálható és szabad fágot; ha a vizsgálandó törzs nem Bacillus, Használjon fággal készített antiszérumot vagy 0,2%-os nátrium-citrát oldatot a log fázisú lizogén sejtek mosásához a felületen adszorbeált és szabad fág eltávolítására. 10 perces, 4000 fordulat/perc sebességgel végzett centrifugálás után a felülúszóhoz érzékeny indikátorbaktériumokat adhatunk kétrétegű lemezes meghatározáshoz, amellyel a minta szabad fágját és a lizogén baktériumokat adszorbeáló fágot teszteljük. A fág centrifugálás után A sejteket indukáljuk.
3. Lizogén baktériumok indukálása: a centrifugálás után összegyűjtött baktériumokat kétszer mossuk steril normál sóoldattal, majd normál sóoldattal vagy 100 mmol/l Tris-HCL pufferrel (pH7,0) 1011 sejt/ml végső koncentrációt készítünk. 5 ml baktériumszuszpenziót minden edénybe, sugározzuk be 30 W-os UV lámpával 30 cm-es távolságból 30 másodpercig, azonnal adjunk hozzá 5 ml kétszeres koncentrációjú LB tenyészoldatot, jól keverjük össze, és inkubáljuk sötétben 37 °C-on 2 órán át.
4. A lizogén törzsek vizsgálata: Kétrétegű agar módszerrel működtessük, a fenti indukált lizátumhoz adjunk néhány csepp kloroformot, és megfelelően hígítsuk a 10-szeres hígításos módszerrel. A hígítás három hígításának kiválasztása után vegyen be 0,3 ml-t minden hígításhoz. Keverje jól össze 0,2 ml logaritmikus fázisérzékeny E. coli 226 baktérium szuszpenzióval, majd adjon hozzá LB féltest tápközeget, amelyet megolvasztott és 45 °C-ra hűtött, azonnal keverje össze, majd öntse az LB szilárd táptalajra. Megszilárdulás után 37 Inkubálja ℃-on 6 órán át, és figyelje meg. Ha nagyszámú plakk jelenik meg a tenyésztett lemezen, ez azt bizonyítja, hogy a vizsgált törzs lizogén.
A baktériumok lizogenitásának ellenőrzéséhez kövesse a fenti lépéseket. Ügyeljen a folyamat sterilitására működés közben, hogy elkerülje a nem megfelelő működést, amely befolyásolja a vizsgálati eredményeket.
The FAI climbed 5.9 percent year-on-year in the first 11 months of 2018, quickening from the 5.7-percent growth in Jan-Oct, the National Bureau of Statistics (NBS) said Friday in an online statement.
The key indicator of investment, dubbed a major growth driver, hit the bottom in August and has since started to rebound steadily.
In the face of emerging economic challenges home and abroad, China has stepped up efforts to stabilize investment, in particular rolling out measures to motivate private investors and channel funds into infrastructure.
Friday's data showed private investment, accounting for more than 60 percent of the total FAI, expanded by a brisk 8.7 percent.
NBS spokesperson Mao Shengyong said funds into weak economic links registered rapid increases as investment in environmental protection and agriculture jumped 42 percent and 12.5 percent respectively, much faster than the average.
In breakdown, investment in high-tech and equipment manufacturing remained vigorous with 16.1-percent and 11.6-percent increases respectively in the first 11 months. Infrastructure investment gained 3.7 percent, staying flat. Investment in property development rose 9.7 percent, also unchanged.