English
A sejtlízis fontos kísérleti módszer a sejtek permeabilitásának és aktivitásának megváltoztatására. Ez azt jelenti, hogy miután egy sejtet megfertőzött egy vírus, a vírus a gazdasejtben lévő tápanyagokat felhasználva szintetizálja saját utódait, majd a vírus utódja elpusztítja a gazdasejtet, és kiszabadul a sejtekből. A sejtlízises kísérletekben a sejttenyésztő lombik gyakori fogyóeszköz. A sejtlízis lépései a következők:
1. Öntse ki a táptalajt, és csavarja fel a sejttenyésztő palackot fejjel lefelé nedvszívó papírra, hogy az abszorbens papír felszívja a táptalajt (vagy állítsa a palackot függőlegesen egy ideig, hogy a maradék táptalaj a palack aljára folyjon majd pipettával szívja ki ).
2. Adjon hozzá 3 ml 4 °C-os előhűtött PBS-t (0,01 M pH 7,2～7,3) minden egyes üveg sejthez. Fektesse le a sejteket, és finoman rázza 1 percig a sejtek mosásához, majd dobja ki a mosóoldatot. Ismételje meg a fenti műveletet kétszer, a sejteket háromszor mosva lemosva a tenyészfolyadékot. Dobja el a PBS-t, és helyezze a tenyészlombikot jégre.
3. Adjunk hozzá 10 ul PMSF-et (100 mM) 1 ml lízispufferhez, jól rázzuk fel és tegyük jégre. (A PMSF-et a lízisoldattal való keverés előtt addig kell rázni, amíg kristályok nem lesznek.)
4. Adjunk 400 ul PMSF-et tartalmazó lízispuffert minden sejtlombikhoz, és lizáljuk jégen 30 percig. A sejtek teljes lizálása érdekében a lombikot gyakran fel kell rázni.
5. A lízis után egy tiszta kaparóval kaparja le a sejteket a tenyésztő lombik egyik oldalán (a műveletnek gyorsnak kell lennie), majd egy pisztoly segítségével mozgassa a sejttörmeléket és a lizátumot egy 1,5 ml-es centrifugacsőbe. (A teljes műveletet lehetőleg jégen kell végezni.)
6. Centrifugálja 12000 fordulat/perc sebességgel 4 °C-on 5 percig. (Előzetesen kapcsolja be a centrifugát az előhűtéshez)
7. Tegye át a centrifugált felülúszót egy centrifugacsőbe 0,5 percre, és tárolja -20 °C-on. A
Sejttenyésztő lombik nem csak sejtlízis kísérletekhez, hanem közepes méretű sejt- és szövettenyésztéshez is használható laboratóriumban, például Vero sejtekben. , HEK 293 sejtek, CAR-T sejtek, CHO sejtek, rovarsejtek stb.
The FAI climbed 5.9 percent year-on-year in the first 11 months of 2018, quickening from the 5.7-percent growth in Jan-Oct, the National Bureau of Statistics (NBS) said Friday in an online statement.
The key indicator of investment, dubbed a major growth driver, hit the bottom in August and has since started to rebound steadily.
In the face of emerging economic challenges home and abroad, China has stepped up efforts to stabilize investment, in particular rolling out measures to motivate private investors and channel funds into infrastructure.
Friday's data showed private investment, accounting for more than 60 percent of the total FAI, expanded by a brisk 8.7 percent.
NBS spokesperson Mao Shengyong said funds into weak economic links registered rapid increases as investment in environmental protection and agriculture jumped 42 percent and 12.5 percent respectively, much faster than the average.
In breakdown, investment in high-tech and equipment manufacturing remained vigorous with 16.1-percent and 11.6-percent increases respectively in the first 11 months. Infrastructure investment gained 3.7 percent, staying flat. Investment in property development rose 9.7 percent, also unchanged.