लाइसोजेनिक बैक्टीरिया की जांच में सेल कल्चर फ्लास्क का अनुप्रयोग

लाइसोजेनिक बैक्टीरिया उन जीवाणुओं को संदर्भित करते हैं जिनके गुणसूत्रों पर प्रोफेजेस एकीकृत होते हैं और बिना लाइस किए सामान्य रूप से विकसित और प्रजनन कर सकते हैं। हल्के बैक्टीरियोफेज का व्यापक रूप से पारगमन, आनुवंशिक इंजीनियरिंग वैक्टर और आणविक जीव विज्ञान के क्षेत्र में उपयोग किया गया है। बैक्टीरिया की लाइसोजेनेसिटी की जांच के लिए सेल कल्चर फ्लास्क का उपयोग किया जा सकता है। विशिष्ट संचालन विधि इस प्रकार है:

1। लाइसोजेनिक बैक्टीरिया की संस्कृति: इनोक्यूलेट ई. कोलाई 225 (λ) एलबी ढलान द्वारा सक्रिय एक 250 मिलीलीटर सेल संस्कृति फ्लास्क में 20 मिलीलीटर एलबी संस्कृति समाधान, 16 घंटे के लिए 30 डिग्री सेल्सियस पर मिलाते हुए संस्कृति, और फिर इसमें से 2 मिलीलीटर जीवाणु निलंबन लें और इसे दूसरे से कनेक्ट करें 250 मिलीलीटर एर्लेनमेयर फ्लास्क में 20 मिलीलीटर एलबी शोरबा, 37 डिग्री सेल्सियस पर 2 घंटे के लिए लॉगरिदमिक चरण के लिए मिलाते हुए संस्कृति।

2। मुक्त फेज को छोड़ दें: यदि परीक्षण किया जाने वाला स्ट्रेन बैसिलस है, तो इसे बीजाणु निलंबन में बनाया जा सकता है, और फिर फेज को मारने के लिए 10 मिनट के लिए 80 डिग्री सेल्सियस पर इलाज किया जा सकता है जो कि लाइसोजेनिक बैक्टीरिया की सतह पर adsorbed और मुक्त हो सकता है; यदि परीक्षण किया जाने वाला स्ट्रेन गैर-बैसिलस है, तो सतह से सोखने वाले और मुक्त फेज को हटाने के लिए लॉग चरण लाइसोजेन कोशिकाओं को धोने के लिए फेज या 0.2% सोडियम साइट्रेट समाधान द्वारा तैयार एंटीसेरम का उपयोग करें। 10 मिनट के लिए 4000r/मिनट पर सेंट्रीफ्यूजेशन के बाद, सतह पर तैरनेवाला डबल-लेयर प्लेट निर्धारण के लिए संवेदनशील संकेतक बैक्टीरिया के साथ जोड़ा जा सकता है, जिसका उपयोग नमूने के मुक्त फेज और लाइसोजेनिक बैक्टीरिया को सोखने वाले फेज का परीक्षण करने के लिए किया जाता है। सेंट्रीफ्यूजेशन के बाद की फेज कोशिकाएं प्रेरित होती हैं।

3. लाइसोजेनिक बैक्टीरिया का प्रेरण: सेंट्रीफ्यूजेशन के बाद एकत्र किए गए बैक्टीरिया को दो बार बाँझ सामान्य खारा से धोया जाता है, और सामान्य खारा या 100 मिमीोल / एल ट्रिस-एचसीएल बफर (पीएच 7.0) के साथ 1011 कोशिकाओं / एमएल की अंतिम एकाग्रता में बनाया जाता है। जीवाणु निलंबन के लिए, जोड़ें प्रत्येक डिश में 5 मि.ली. बैक्टीरियल सस्पेंशन, 30 सें.मी. की दूरी पर 30 सें.मी. की दूरी पर 30 वाट यूवी लैम्प से विकिरणित करें, तुरंत 5 मि.ली. डबल-कंसंट्रेशन एलबी कल्चर सॉल्यूशन डालें, अच्छी तरह मिलाएं और 2 घंटे के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर अंधेरे में इनक्यूबेट करें। 4. लाइसोजेनिक उपभेदों का निरीक्षण: डबल-लेयर अगर विधि के अनुसार संचालित करें, उपरोक्त प्रेरित लाइसेट में क्लोरोफॉर्म की कुछ बूँदें जोड़ें, और 10-गुना कमजोर पड़ने की विधि के साथ उचित रूप से पतला करें। कमजोर पड़ने के तीन कमजोर पड़ने का चयन करने के बाद, प्रत्येक कमजोर पड़ने के लिए 0.3 मिलीलीटर लें। लॉगरिदमिक फेज सेंसिटिव ई. कोलाई 226 बैक्टीरिया सस्पेंशन के 0.2 एमएल के साथ अच्छी तरह मिलाएं, फिर एलबी हाफ-बॉडी मीडियम डालें जो पिघल गया है और 45 डिग्री सेल्सियस तक ठंडा हो गया है, तुरंत मिलाएं, और फिर इसे एलबी सॉलिड मीडियम प्लेट पर डालें। जमने के बाद, 37 6 घंटे के लिए ℃ पर इनक्यूबेट करें और निरीक्षण करें । यदि सुसंस्कृत प्लेट पर बड़ी संख्या में प्लाक दिखाई देते हैं, तो यह साबित करता है कि परीक्षण किया गया स्ट्रेन एक लाइसोजेन है। परीक्षण के परिणामों को प्रभावित करने वाले अनुचित संचालन से बचने के लिए ऑपरेशन के दौरान प्रक्रिया की बाँझपन पर ध्यान दें।

4. Inspection of lysogenic strains: Operate according to the double-layer agar method, add a few drops of chloroform to the above induced lysate, and dilute appropriately with the 10-fold dilution method. After selecting the three dilutions of the dilution, take 0.3ml for each dilution. Mix well with 0.2ml of logarithmic phase sensitive E. coli 226 bacteria suspension, then add LB half-body medium that has been melted and cooled to 45°C, mix immediately, and then pour it onto the LB solid medium plate. After solidification, 37 Incubate at ℃ for 6h and observe. If a large number of plaques appear on the cultured plate, it proves that the tested strain is a lysogen.

To check whether the bacteria have lysogenicity, follow the above steps. Pay attention to the sterility of the process during operation to avoid improper operation that affects the test results.

The FAI climbed 5.9 percent year-on-year in the first 11 months of 2018, quickening from the 5.7-percent growth in Jan-Oct, the National Bureau of Statistics (NBS) said Friday in an online statement.

The key indicator of investment, dubbed a major growth driver, hit the bottom in August and has since started to rebound steadily.

In the face of emerging economic challenges home and abroad, China has stepped up efforts to stabilize investment, in particular rolling out measures to motivate private investors and channel funds into infrastructure.

Friday's data showed private investment, accounting for more than 60 percent of the total FAI, expanded by a brisk 8.7 percent.

NBS spokesperson Mao Shengyong said funds into weak economic links registered rapid increases as investment in environmental protection and agriculture jumped 42 percent and 12.5 percent respectively, much faster than the average.

In breakdown, investment in high-tech and equipment manufacturing remained vigorous with 16.1-percent and 11.6-percent increases respectively in the first 11 months. Infrastructure investment gained 3.7 percent, staying flat. Investment in property development rose 9.7 percent, also unchanged.