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Matériels et méthodes
3.1. Shake Flask Cultures
Les pré-cultures de cellules en suspension MDCK.SUS2 ont été cultivées dans Les cellules ont été cultivées dans un milieu chimiquement défini, sans protéine et sans composant animal, Smif8 (Smif8 PGD 2×, complété avec 5 mM de glutamine et 8 mM pyruvate), spécifiquement développé pour la culture de cellules MDCK en suspension [95]. (flacons Erlenmeyer en polycarbonate de 125 mL, #431143, Corning®, New York, NY, États-Unis) avec un volume de travail de 50 mL (wv) , dans un incubateur Multitron Pro (Infors HT, Bottmingen, Suisse) à 37 °C et 5 % de CO2 avec une fréquence d'agitation de 180 tr/min. Les cellules ont été repiquées tous les 3 à 4 jours avec une densité d'ensemencement de 0,5 à 0,8 × 106 cellules/mL. dans les cellules MDCK adhérentes (ECACC # 84121903). Le virus de semence avait un titre de 1,1 × 109 TCID50/mL.
Des expériences de croissance et d'infection pour la validation du modèle ont été réalisées à l'aide de flacons à agitation de 500 mL (#4113-0500, Nalgene™, Thermo Scientific, Waltham, MA, USA) avec un volume de culture initial de 200 mL à 150 rpm. Deux cultures ont été réalisées, une infection simulée (Culture 1), où les cellules ont poussé pendant environ 200 h, et une infection (Culture 2), où les cellules ont été infectées par l'IAV environ 49 h après l'inoculation. Pour obtenir une infection synchrone de la population cellulaire, un moi = 10 a été utilisé. En raison de la concentration cellulaire relativement faible au moment de l'infection (2,1 × 106 cellules/mL) et de la moi élevée utilisée, ni le remplacement du milieu ni l'ajout de trypsine (pour l'activation du virus) n'étaient nécessaires. Dans les deux cultures, de l'eau stérile Milli-Q a été ajoutée avant l'échantillonnage pour compenser l'évaporation de l'eau (1 à 2 ml/jour) puisque l'expérience a été réalisée dans un incubateur non hydraté.
Source de :
https:/ /www.mdpi.com/2218-1989/12/3/239/htm
Source from: https://www.mdpi.com/2218-1989/12/3/239/htm
The FAI climbed 5.9 percent year-on-year in the first 11 months of 2018, quickening from the 5.7-percent growth in Jan-Oct, the National Bureau of Statistics (NBS) said Friday in an online statement.
The key indicator of investment, dubbed a major growth driver, hit the bottom in August and has since started to rebound steadily.
In the face of emerging economic challenges home and abroad, China has stepped up efforts to stabilize investment, in particular rolling out measures to motivate private investors and channel funds into infrastructure.
Friday's data showed private investment, accounting for more than 60 percent of the total FAI, expanded by a brisk 8.7 percent.
NBS spokesperson Mao Shengyong said funds into weak economic links registered rapid increases as investment in environmental protection and agriculture jumped 42 percent and 12.5 percent respectively, much faster than the average.
In breakdown, investment in high-tech and equipment manufacturing remained vigorous with 16.1-percent and 11.6-percent increases respectively in the first 11 months. Infrastructure investment gained 3.7 percent, staying flat. Investment in property development rose 9.7 percent, also unchanged.