English
Les bactéries lysogènes font référence aux bactéries qui ont des prophages intégrés sur leurs chromosomes et qui peuvent se développer et se reproduire normalement sans être lysées. Les bactériophages doux ont été largement utilisés dans les domaines de la transduction, des vecteurs de génie génétique et de la biologie moléculaire. Le flacon de culture cellulaire peut être utilisé pour vérifier la lysogénicité des bactéries. La méthode de fonctionnement spécifique est la suivante :
1. Culture de bactéries lysogènes : Inoculer E. coli 225 (λ) activé par la pente LB dans un flacon de culture cellulaire de 250 ml contenant 20 ml de solution de culture LB, culture sous agitation à 30°C pendant 16 heures, puis prélever 2 ml de suspension bactérienne et le connecter à un autre Dans un erlenmeyer de 250ml contenant 20ml de bouillon LB, culture sous agitation à 37°C pendant 2h jusqu'à phase logarithmique.
2. Exclure le phage libre : si la souche à tester est Bacillus, elle peut être transformée en une suspension de spores, puis traitée à 80 °C pendant 10 minutes pour tuer le phage qui peut être adsorbé et libre à la surface des bactéries lysogènes ; si la souche à tester n'est pas Bacillus, utilisez un antisérum préparé par phage ou une solution de citrate de sodium à 0,2 % pour laver les cellules lysogènes en phase logarithmique afin d'éliminer les phages adsorbés en surface et libres. Après centrifugation à 4000 tr/min pendant 10 minutes, le surnageant peut être additionné de bactéries indicatrices sensibles pour la détermination de la plaque double couche, qui est utilisée pour tester le phage libre de l'échantillon et le phage qui adsorbe les bactéries lysogènes. Le phage après centrifugation Les cellules sont induites.
3. Induction de bactéries lysogéniques : les bactéries recueillies après centrifugation sont lavées deux fois avec une solution saline normale stérile et amenées à une concentration finale de 1011 cellules/ml avec une solution saline normale ou 100 mmol/l de tampon Tris-HCL (pH7,0). Pour la suspension bactérienne, ajouter 5ml de suspension bactérienne dans chaque boîte, irradier avec une lampe UV 30W à une distance de 30cm pendant 30s, ajouter immédiatement 5ml de solution de culture LB double concentration, bien mélanger et incuber dans le noir à 37°C pendant 2h.
4. Inspection des souches lysogéniques : Opérer selon la méthode de la gélose double couche, ajouter quelques gouttes de chloroforme au lysat induit ci-dessus, et diluer convenablement avec la méthode de dilution au 10ème. Après avoir sélectionné les trois dilutions de la dilution, prélever 0,3 ml pour chaque dilution. Bien mélanger avec 0,2 ml de suspension de bactéries E. coli 226 sensibles à la phase logarithmique, puis ajouter le milieu demi-corps LB qui a été fondu et refroidi à 45 ° C, mélanger immédiatement, puis le verser sur la plaque de milieu solide LB. Après solidification, 37 Incuber à ℃ pendant 6h et observer. Si un grand nombre de plages apparaissent sur la plaque de culture, cela prouve que la souche testée est un lysogène.
Pour vérifier si les bactéries ont une lysogénicité, suivez les étapes ci-dessus. Faites attention à la stérilité du processus pendant le fonctionnement pour éviter un fonctionnement incorrect qui affecte les résultats du test.
The FAI climbed 5.9 percent year-on-year in the first 11 months of 2018, quickening from the 5.7-percent growth in Jan-Oct, the National Bureau of Statistics (NBS) said Friday in an online statement.
The key indicator of investment, dubbed a major growth driver, hit the bottom in August and has since started to rebound steadily.
In the face of emerging economic challenges home and abroad, China has stepped up efforts to stabilize investment, in particular rolling out measures to motivate private investors and channel funds into infrastructure.
Friday's data showed private investment, accounting for more than 60 percent of the total FAI, expanded by a brisk 8.7 percent.
NBS spokesperson Mao Shengyong said funds into weak economic links registered rapid increases as investment in environmental protection and agriculture jumped 42 percent and 12.5 percent respectively, much faster than the average.
In breakdown, investment in high-tech and equipment manufacturing remained vigorous with 16.1-percent and 11.6-percent increases respectively in the first 11 months. Infrastructure investment gained 3.7 percent, staying flat. Investment in property development rose 9.7 percent, also unchanged.