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La lyse cellulaire est une méthode expérimentale importante pour modifier la perméabilité et l'activité des cellules. Cela signifie qu'après qu'une cellule est infectée par un virus, le virus utilise les nutriments de la cellule hôte pour synthétiser sa propre progéniture, puis la progéniture virale détruit la cellule hôte et est libérée des cellules. Dans les expériences de lyse cellulaire, flacons de culture cellulaire sont un consommable courant. Les étapes de la lyse cellulaire sont les suivantes :
1. Versez le milieu de culture et bouclez le flacon de culture cellulaire à l'envers sur du papier absorbant afin que le papier absorbant absorbe le milieu de culture (ou mettez le flacon debout pendant un certain temps pour permettre au milieu de culture résiduel de s'écouler au fond du flacon puis utilisez une pipette pour l'aspirer ).
2. Ajouter 3 ml de PBS pré-refroidi à 4 ℃ (0,01 M pH7.2～7.3) à chaque bouteille de cellules. Poser les cellules à plat et agiter doucement pendant 1 min pour laver les cellules, puis jeter la solution de lavage. Répétez l'opération ci-dessus deux fois, en lavant les cellules trois fois pour laver le liquide de culture. Jetez le PBS et placez le flacon de culture sur de la glace.
3. Ajouter 10 ul de PMSF (100 mM) à 1 ml de tampon de lyse, bien agiter et placer sur de la glace. (Le PMSF doit être secoué jusqu'à ce qu'il n'y ait plus de cristaux avant de le mélanger avec la solution de lyse.)
4. Ajouter 400 ul de tampon de lyse contenant du PMSF à chaque flacon de cellules et lyser sur de la glace pendant 30 minutes. Afin de lyser complètement les cellules, le flacon doit être agité fréquemment.
5. Après la lyse, utilisez un grattoir propre pour gratter les cellules d'un côté du flacon de culture (l'action doit être rapide), puis utilisez un pistolet pour déplacer les débris cellulaires et le lysat dans un tube à centrifuger de 1,5 ml. (Toute l'opération doit être effectuée sur de la glace autant que possible.)
6. Centrifuger à 12000 rpm à 4°C pendant 5 min. (Allumez la centrifugeuse à l'avance pour pré-refroidir)
7. Transférer le surnageant centrifugé dans un tube à centrifuger pendant 0,5 min et le conserver à -20°C.
Fioles de culture cellulaire ne sont pas seulement utilisés pour les expériences de lyse cellulaire, mais aussi pour la culture cellulaire et tissulaire à moyenne échelle en laboratoire, comme les cellules Vero , cellules HEK 293, cellules CAR-T, cellules CHO, cellules d'insectes, etc.
The FAI climbed 5.9 percent year-on-year in the first 11 months of 2018, quickening from the 5.7-percent growth in Jan-Oct, the National Bureau of Statistics (NBS) said Friday in an online statement.
The key indicator of investment, dubbed a major growth driver, hit the bottom in August and has since started to rebound steadily.
In the face of emerging economic challenges home and abroad, China has stepped up efforts to stabilize investment, in particular rolling out measures to motivate private investors and channel funds into infrastructure.
Friday's data showed private investment, accounting for more than 60 percent of the total FAI, expanded by a brisk 8.7 percent.
NBS spokesperson Mao Shengyong said funds into weak economic links registered rapid increases as investment in environmental protection and agriculture jumped 42 percent and 12.5 percent respectively, much faster than the average.
In breakdown, investment in high-tech and equipment manufacturing remained vigorous with 16.1-percent and 11.6-percent increases respectively in the first 11 months. Infrastructure investment gained 3.7 percent, staying flat. Investment in property development rose 9.7 percent, also unchanged.