نحوه استفاده از فلاسک های کشت سلولی برای شناسایی کلنی های E. coli

باکتری های کلیفرم به گروهی از باکتری های غیر باسیلی گرم منفی اطلاق می شود که می توانند لاکتوز را تخمیر کنند، اسید و گاز تولید کنند، هوازی و بی هوازی اختیاری تولید کنند. در کاربردهای عملی، اغلب به عنوان نشانگر آلوده بودن غذا توسط مدفوع استفاده می شود. در بین تمام روش‌های تشخیص، استفاده از فلاسکهای کشت سلولی برای تشخیص رایج‌تر است. مراحل عملیات به شرح زیر است:

1. نمونه برداری و رقت

(1) طبق روش آسپتیک، 25 گرم (یا 25 میلی لیتر) از نمونه آزمایش را در یک فلاسک کشت سلولی حاوی 225 میلی لیتر آب استریل (تعداد مناسب دانه های شیشه ای از پیش تعیین شده در فلاسک) یا یک ملات استریل شده قرار دهید. و آن را کاملا تکان دهید. یا آسیاب کنید تا رقت یکنواخت 1:10 ایجاد شود. بهتر است از هموژنایزر استریل برای نمونه های جامد استفاده کنید و با سرعت 8000～10000r/min به مدت 1 دقیقه سانتریفیوژ کنید تا رقت 1:10 ایجاد شود.

(2) از نی استریل 1 میلی لیتری استفاده کنید. برای مکیدن 1 میلی لیتر رقت 1:10، آن را در یک لوله آزمایش حاوی 9 میلی لیتر آب استریل بریزید، تکان دهید و مخلوط کنید تا رقت 1:100 ایجاد شود، با یک نی استریل 1 میلی لیتر جایگزین کنید، فشار دهید. .

(3) با توجه به الزامات بهداشتی مواد غذایی یا برآورد آلودگی نمونه های آزمایشی، سه رقت را انتخاب و برای هر رقت 3 لوله تلقیح کنید. همچنین می توان مستقیماً با نمونه تلقیح کرد.

2. آزمایش تخمیر اولیه لاکتوز

این معمولا به عنوان آزمایش فرضی نامیده می شود. هدف آن بررسی نمونه برای باکتری هایی است که لاکتوز را برای تولید گاز تخمیر می کنند. نمونه مورد آزمایش در لوله تخمیر نمک صفراوی لاکتوز تلقیح می شود، لوله تخمیر نمک صفراوی لاکتوز دوگانه برای تلقیح بالای 1 میلی لیتر استفاده می شود. لوله تخمیر نمک صفراوی لاکتوز برای 1 میلی لیتر و کمتر از 1 میلی لیتر استفاده می شود. برای هر رقت 3 لوله تلقیح کرده و در انکوباتور 1±36 درجه سانتیگراد به مدت 2±24 ساعت قرار دهید. اگر تمام لوله های تخمیر نمک صفراوی لاکتوز گاز تولید نکنند، می توان آن را برای باکتری های کلیفرم منفی گزارش کرد. اگر گاز تولید می شود، روش زیر را دنبال کنید.

3. کشت جداسازی

لوله‌های تخمیر تولید کننده گاز به صورت رگه‌ای روی صفحات ائوزین متیلن بلو آگار تلقیح شدند و در انکوباتور در دمای 1±36 درجه سانتی‌گراد به مدت 24-18 ساعت کشت داده شدند. سپس مورفولوژی کلنی مشاهده شد و رنگ آمیزی گرم، بررسی میکروسکوپی و آزمایش تخمیر مجدد انجام شد.

4. تست تخمیر مضاعف لاکتوز

به اصطلاح تست تاییدیه که هدف آن اثبات این است که باکتری های گرم منفی غیرباسیلوس جدا شده از لوله آزمایش که در آزمایش تخمیر اولیه لاکتوز مثبت بود، در واقع می توانند لاکتوز را تخمیر کنند تا گاز تولید کنند. روی محیط EMB انتخابی فوق، 1 تا 2 کلنی کلیفرم مشکوک را برای رنگ آمیزی گرم انتخاب کنید و همزمان لوله های تخمیر لاکتوز را تلقیح کنید و آنها را در انکوباتور 36±l درجه سانتیگراد به مدت 2±24 ساعت قرار دهید تا گاز مشاهده شود. تولید . در جایی که لوله تخمیر لاکتوز گاز تولید می کند و لکه گرم منفی است، باکتری های بدون باسیل برای کلیفرم ها مثبت گزارش می شوند. در جایی که لوله تخمیر لاکتوز گاز تولید نمی کند یا رنگ آمیزی گرم مثبت است، برای کلیفرم ها منفی گزارش می شود.

روش عملیاتی استفاده از فلاسک های کشت سلولی برای تشخیص شاخص های گروه E. coli است. اشریشیا کلی یک شاخص مهم است که نشان می دهد آیا غذا آلوده است یا خیر. تسلط بر روش تشخیص یک مهارت اساسی است که هر بازرس مواد غذایی باید از آن برخوردار باشد.

The FAI climbed 5.9 percent year-on-year in the first 11 months of 2018, quickening from the 5.7-percent growth in Jan-Oct, the National Bureau of Statistics (NBS) said Friday in an online statement.

The key indicator of investment, dubbed a major growth driver, hit the bottom in August and has since started to rebound steadily.

In the face of emerging economic challenges home and abroad, China has stepped up efforts to stabilize investment, in particular rolling out measures to motivate private investors and channel funds into infrastructure.

Friday's data showed private investment, accounting for more than 60 percent of the total FAI, expanded by a brisk 8.7 percent.

NBS spokesperson Mao Shengyong said funds into weak economic links registered rapid increases as investment in environmental protection and agriculture jumped 42 percent and 12.5 percent respectively, much faster than the average.

In breakdown, investment in high-tech and equipment manufacturing remained vigorous with 16.1-percent and 11.6-percent increases respectively in the first 11 months. Infrastructure investment gained 3.7 percent, staying flat. Investment in property development rose 9.7 percent, also unchanged.