کاربرد فلاسک های کشت سلولی در بررسی باکتری های لیزوژنیک

باکتری های لیزوژنیک به باکتری هایی اطلاق می شود که دارای پروفاژهای یکپارچه در کروموزوم های خود هستند و می توانند بدون لیز شدن به طور طبیعی رشد و تولید مثل کنند. باکتریوفاژهای خفیف به طور گسترده در زمینه های انتقال، ناقل های مهندسی ژنتیک و زیست شناسی مولکولی استفاده شده اند. سلول فلاسک را می توان برای بررسی لیزوژنیسیته باکتری ها استفاده کرد. روش عملیات خاص به شرح زیر است:

1. کشت باکتری لیزوژن: E. coli 225 (λ) فعال شده توسط شیب LB را در یک فلاسک کشت سلولی 250 میلی لیتری حاوی 20 میلی لیتر محلول کشت LB تلقیح کرده و با تکان دادن در دمای 30 درجه سانتی گراد به مدت 16 ساعت کشت داده و سپس 2 میلی لیتر سوسپانسیون باکتری را از آن گرفته و آن را به دیگری وصل کنید در یک ارلن 250 میلی لیتری حاوی 20 میلی لیتر براث LB، با تکان دادن در دمای 37 درجه سانتیگراد به مدت 2 ساعت تا فاز لگاریتمی کشت دهید.

2. حذف فاژ آزاد: اگر سویه مورد آزمایش باسیلوس باشد، می توان آن را به یک سوسپانسیون اسپور تبدیل کرد و سپس در دمای 80 درجه سانتیگراد به مدت 10 دقیقه تحت درمان قرار داد تا فاژی را که ممکن است جذب شده و در سطح باکتری لیزوژن آزاد شود، از بین ببرد. اگر سویه مورد آزمایش غیر باسیلوسی باشد، از آنتی سرم تهیه شده توسط فاژ یا محلول سیترات سدیم 0.2% برای شستن سلول های لیزوژن لگ فاز برای حذف فاژهای جذب شده و آزاد در سطح استفاده کنید. پس از سانتریفیوژ با سرعت 4000r/min به مدت 10 دقیقه، مایع رویی را می توان با باکتری های شاخص حساس برای تعیین صفحه دو لایه اضافه کرد، که برای آزمایش فاژ آزاد نمونه و فاژی که باکتری های لیزوژن را جذب می کند، استفاده می شود. فاژ بعد از سانتریفیوژ سلول ها القا می شوند.

3. القای باکتری های لیزوژن: باکتری های جمع آوری شده پس از سانتریفیوژ دو بار با نرمال سالین استریل شسته می شوند و به غلظت نهایی 1011 سلول در میلی لیتر با نرمال سالین یا 100 میلی مول در لیتر بافر Tris-HCL (pH7.0) برای سوسپانسیون باکتریایی، اضافه می شود. 5 میلی لیتر سوسپانسیون باکتریایی در هر ظرف، با یک لامپ UV 30 واتی در فاصله 30 سانتی متری به مدت 30 ثانیه تابش کنید، بلافاصله 5 میلی لیتر محلول کشت LB با غلظت دوگانه اضافه کنید، خوب مخلوط کنید و در تاریکی در دمای 37 درجه سانتی گراد به مدت 2 ساعت انکوبه کنید.

4. بازرسی سویه های لیزوژنیک: طبق روش آگار دولایه عمل کنید، چند قطره کلروفرم را به لیز القا شده فوق اضافه کنید و با روش رقت دهی به طور مناسب رقیق کنید. پس از انتخاب سه رقت رقت، برای هر رقت 0.3 میلی لیتر مصرف کنید. با 0.2 میلی لیتر سوسپانسیون باکتری E. coli 226 حساس به فاز لگاریتمی خوب مخلوط کنید، سپس محیط نیمه بدن LB را که ذوب شده و تا دمای 45 درجه سانتیگراد سرد شده است، اضافه کنید، بلافاصله مخلوط کنید و سپس آن را روی صفحه محیط جامد LB بریزید. پس از انجماد، 37 در دمای ℃ به مدت 6 ساعت جوجه کشی کنید و مشاهده کنید. اگر تعداد زیادی پلاک روی پلیت کشت شده ظاهر شود، ثابت می کند که سویه آزمایش شده لیزوژن است.

برای بررسی اینکه آیا باکتری لیزوژنیسیته دارد، مراحل بالا را دنبال کنید. به استریل بودن فرآیند در حین کار توجه کنید تا از عملکرد نادرست که بر نتایج آزمایش تأثیر می گذارد جلوگیری شود.

The FAI climbed 5.9 percent year-on-year in the first 11 months of 2018, quickening from the 5.7-percent growth in Jan-Oct, the National Bureau of Statistics (NBS) said Friday in an online statement.

The key indicator of investment, dubbed a major growth driver, hit the bottom in August and has since started to rebound steadily.

In the face of emerging economic challenges home and abroad, China has stepped up efforts to stabilize investment, in particular rolling out measures to motivate private investors and channel funds into infrastructure.

Friday's data showed private investment, accounting for more than 60 percent of the total FAI, expanded by a brisk 8.7 percent.

NBS spokesperson Mao Shengyong said funds into weak economic links registered rapid increases as investment in environmental protection and agriculture jumped 42 percent and 12.5 percent respectively, much faster than the average.

In breakdown, investment in high-tech and equipment manufacturing remained vigorous with 16.1-percent and 11.6-percent increases respectively in the first 11 months. Infrastructure investment gained 3.7 percent, staying flat. Investment in property development rose 9.7 percent, also unchanged.