کاربرد فلاسک کشت سلولی در آزمایش لیز سلولی

لیز سلولی یک روش تجربی مهم برای تغییر نفوذپذیری و فعالیت سلولی است. این بدان معناست که پس از آلوده شدن یک سلول به ویروس، ویروس از مواد مغذی موجود در سلول میزبان برای سنتز فرزندان خود استفاده می کند و سپس نسل ویروس سلول میزبان را از بین می برد و از سلول خارج می شود. در آزمایشات لیز سلولی، فلاسکهای کشت سلولی یک ماده مصرفی رایج است. مراحل لیز سلولی به شرح زیر است:

1. محیط کشت را بیرون بریزید و بطری کشت سلولی را وارونه روی کاغذ جاذب ببندید تا کاغذ جاذب محیط کشت را جذب کند (یا بطری را برای مدتی در حالت عمودی قرار دهید تا محیط کشت باقیمانده به ته بطری جریان یابد. و سپس از یک پیپت برای مکیدن آن استفاده کنید.

2. 3 میلی لیتر PBS از قبل خنک شده 4 درجه سانتیگراد (0.01M pH7.2～7.3) به هر بطری سلول اضافه کنید. سلول ها را صاف بگذارید و به مدت 1 دقیقه به آرامی تکان دهید تا سلول ها شسته شوند و سپس محلول شستشو را دور بریزید. عمل فوق را دو بار تکرار کنید، سلول ها را سه بار بشویید تا مایع کشت شسته شود. PBS را دور بریزید و فلاسک کشت را روی یخ قرار دهید.

3. 10 لیتر PMSF (100 میلی‌مولار) را به 1 میلی‌لیتر بافر لیز اضافه کنید، خوب تکان دهید و روی یخ قرار دهید. (PMSF باید قبل از مخلوط شدن با محلول لیز تا زمانی که کریستالی وجود نداشته باشد تکان داده شود.)

4. 400 لیتر از بافر لیز حاوی PMSF را به هر فلاسک سلول اضافه کنید و به مدت 30 دقیقه روی یخ لیز کنید. برای لیز کامل سلول ها باید فلاسک را مرتب تکان داد.

5. پس از لیز، از یک خراش دهنده تمیز برای خراش دادن سلول ها در یک طرف فلاسک کشت استفاده کنید (عمل باید سریع باشد)، و سپس از یک تفنگ برای انتقال بقایای سلولی و لیز کردن به یک لوله سانتریفیوژ 1.5 میلی لیتری استفاده کنید. (تمام عملیات تا حد امکان روی یخ انجام شود.)

6. سانتریفیوژ 12000 دور در دقیقه در 4 درجه سانتی گراد به مدت 5 دقیقه. (سانتریفیوژ را از قبل روشن کنید تا خنک شود)

7. مایع رویی سانتریفیوژ شده را به مدت 0.5 دقیقه به لوله سانتریفیوژ منتقل کنید و آن را در دمای 20- درجه سانتی گراد نگهداری کنید.

فلاسک های کشت سلولی نه تنها برای آزمایش لیز سلولی، بلکه برای کشت سلولی و بافتی در مقیاس متوسط ​​در آزمایشگاه، مانند سلول های Vero استفاده می شود. سلول های HEK 293، سلول های CAR-T، سلول های CHO، سلول های حشرات و غیره

The FAI climbed 5.9 percent year-on-year in the first 11 months of 2018, quickening from the 5.7-percent growth in Jan-Oct, the National Bureau of Statistics (NBS) said Friday in an online statement.

The key indicator of investment, dubbed a major growth driver, hit the bottom in August and has since started to rebound steadily.

In the face of emerging economic challenges home and abroad, China has stepped up efforts to stabilize investment, in particular rolling out measures to motivate private investors and channel funds into infrastructure.

Friday's data showed private investment, accounting for more than 60 percent of the total FAI, expanded by a brisk 8.7 percent.

NBS spokesperson Mao Shengyong said funds into weak economic links registered rapid increases as investment in environmental protection and agriculture jumped 42 percent and 12.5 percent respectively, much faster than the average.

In breakdown, investment in high-tech and equipment manufacturing remained vigorous with 16.1-percent and 11.6-percent increases respectively in the first 11 months. Infrastructure investment gained 3.7 percent, staying flat. Investment in property development rose 9.7 percent, also unchanged.