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Materiales y Métodos
3.1. Shake Flask Cultivations
Se cultivaron precultivos de células en suspensión MDCK.SUS2 en Las células se cultivaron en un medio químicamente definido, sin proteínas y sin componentes animales, Smif8 (Smif8 PGD 2x, suplementado con glutamina 5 mM y 8 piruvato mM), desarrollado específicamente para el cultivo de células MDCK en suspensión [95]. (matraces Erlenmeyer de policarbonato de 125 ml, n.° 431143, Corning®, ciudad de Nueva York, NY, EE. UU.) con un volumen de trabajo de 50 ml (wv) , en una incubadora Multitron Pro (Infors HT, Bottmingen, Suiza) a 37 °C y 5% de atmósfera de CO2 con una frecuencia de agitación de 180 rpm. Las células se pasaron cada 3 o 4 días con una densidad de siembra de 0,5 a 0,8 × 106 células/mL. en células MDCK adherentes (ECACC # 84121903). El virus de semilla tenía un título de 1,1 × 109 TCID50/mL.
Los experimentos de crecimiento e infección para la validación del modelo se realizaron utilizando matraces de agitación de 500 ml (#4113-0500, Nalgene™, Thermo Scientific, Waltham, MA, USA) con un volumen de cultivo inicial de 200 mL a 150 rpm. Se realizaron dos cultivos, uno de infección simulada (Cultivo 1), donde las células crecieron durante aproximadamente 200 horas, y una infección (Cultivo 2), donde las células se infectaron con IAV aproximadamente 49 horas después de la inoculación. Para lograr una infección sincrónica de la población celular, se utilizó un moi = 10. Debido a la concentración de células relativamente baja en el momento de la infección (2,1 × 106 células/mL) y la alta moi utilizada, no fue necesario reemplazar el medio ni agregar tripsina (para la activación del virus). En ambos cultivos, se añadió agua Milli-Q estéril antes del muestreo para compensar la evaporación del agua (1–2 mL/día) ya que el experimento se realizó en una incubadora no hidratada.
Fuente de:
https:/ /www.mdpi.com/2218-1989/12/3/239/htm
Source from: https://www.mdpi.com/2218-1989/12/3/239/htm
The FAI climbed 5.9 percent year-on-year in the first 11 months of 2018, quickening from the 5.7-percent growth in Jan-Oct, the National Bureau of Statistics (NBS) said Friday in an online statement.
The key indicator of investment, dubbed a major growth driver, hit the bottom in August and has since started to rebound steadily.
In the face of emerging economic challenges home and abroad, China has stepped up efforts to stabilize investment, in particular rolling out measures to motivate private investors and channel funds into infrastructure.
Friday's data showed private investment, accounting for more than 60 percent of the total FAI, expanded by a brisk 8.7 percent.
NBS spokesperson Mao Shengyong said funds into weak economic links registered rapid increases as investment in environmental protection and agriculture jumped 42 percent and 12.5 percent respectively, much faster than the average.
In breakdown, investment in high-tech and equipment manufacturing remained vigorous with 16.1-percent and 11.6-percent increases respectively in the first 11 months. Infrastructure investment gained 3.7 percent, staying flat. Investment in property development rose 9.7 percent, also unchanged.