Cómo usar frascos de cultivo celular para detectar colonias de E. coli

Thu May 19 09:57:28 CST 2022

Las bacterias coliformes se refieren a un grupo de bacterias gramnegativas no bacillus que pueden fermentar lactosa, producir ácido y gas, aeróbicas y anaeróbicas facultativas. En aplicaciones prácticas, a menudo se utiliza como indicador de si los alimentos están contaminados con heces. Entre todos los métodos de detección, el uso de frascos de cultivo celular para la detección es el más utilizado. Los pasos de la operación son los siguientes:

1. Muestreo y dilución

(1) De acuerdo con el método aséptico, coloque 25 g (o 25 ml) de la muestra de prueba en un matraz de cultivo celular que contenga 225 ml de agua estéril (cantidad preestablecida apropiada de perlas de vidrio en el matraz) o un mortero esterilizado, y sacúdalo bien. O muela para hacer una dilución uniforme de 1:10. Lo mejor es utilizar un homogeneizador estéril para muestras sólidas y centrifugar a una velocidad de 800010000r/min durante 1 min para hacer una dilución de 1:10.

(2) Utilice una pajita estéril de 1 ml aspirar 1Ml de dilución 1:10, verterlo en un tubo de ensayo que contenga 9mL de agua estéril, agitar y mezclar hasta obtener una dilución 1:100, sustituir por una pajilla estéril de 1mL, presionar Las operaciones anteriores se realizan sucesivamente diluciones en serie de 10 veces .

(3) De acuerdo con los requisitos de higiene de los alimentos o la estimación de la contaminación de las muestras de prueba, seleccione tres diluciones e inocule 3 tubos para cada dilución. También se puede inocular directamente con la muestra.

2. Prueba de fermentación inicial de lactosa

Esto se conoce comúnmente como prueba hipotética. Su propósito es verificar la muestra en busca de bacterias que fermenten la lactosa para producir gas. La muestra a analizar se inocula en el tubo de fermentación de lactosa y sales biliares, el tubo doble de fermentación de lactosa y sales biliares se usa para el inóculo por encima de 1 ml; el tubo de fermentación de sal biliar de lactosa individual se usa para 1 ml y menos de 1 ml. Inocule 3 tubos para cada dilución y colóquelos en una incubadora de 36±1℃ durante 24±2h. Si todos los tubos de fermentación de sales biliares de lactosa no producen gas, se puede informar como negativo para bacterias coliformes. Si hay producción de gas, siga el procedimiento a continuación.

3. Cultivo de separación

Los tubos de fermentación que producen gas se sembraron e inocularon en placas de agar con azul de metileno y eosina, y se cultivaron en una incubadora a 36±1°C durante 18-24 horas. Luego, se observó la morfología de la colonia y se realizó tinción de Gram, examen microscópico y prueba de refermentación.

How to use cell culture flasks to detect E. coli colonies

4. Prueba de doble fermentación de lactosa

La llamada prueba de confirmación, cuyo propósito es demostrar que las bacterias gramnegativas no bacillus aisladas del tubo de ensayo que dio positivo en la prueba inicial de fermentación de lactosa pueden fermentar la lactosa para producir gas. En el medio EMB selectivo mencionado anteriormente, seleccione 1 a 2 colonias de coliformes sospechosas para la tinción de Gram, inocule los tubos de fermentación de lactosa al mismo tiempo y colóquelos en una incubadora a 36±1°C durante 24±2 horas para observar el gas. producción. . Cuando el tubo de fermentación de lactosa produce gas y la tinción de Gram es negativa, las bacterias libres de bacilos se informan como positivas para coliformes; donde el tubo de fermentación de lactosa no produce gas o la tinción de Gram es positiva, se reporta como negativo para coliformes.

El anterior es el método de operación de usar frascos de cultivo celular para detectar indicadores del grupo E. coli. Escherichia coli es un indicador importante que refleja si los alimentos están contaminados. Dominar el método de detección es una habilidad básica que todo inspector de alimentos debe poseer.

The FAI climbed 5.9 percent year-on-year in the first 11 months of 2018, quickening from the 5.7-percent growth in Jan-Oct, the National Bureau of Statistics (NBS) said Friday in an online statement.

The key indicator of investment, dubbed a major growth driver, hit the bottom in August and has since started to rebound steadily.

In the face of emerging economic challenges home and abroad, China has stepped up efforts to stabilize investment, in particular rolling out measures to motivate private investors and channel funds into infrastructure.

Friday's data showed private investment, accounting for more than 60 percent of the total FAI, expanded by a brisk 8.7 percent.

NBS spokesperson Mao Shengyong said funds into weak economic links registered rapid increases as investment in environmental protection and agriculture jumped 42 percent and 12.5 percent respectively, much faster than the average.

In breakdown, investment in high-tech and equipment manufacturing remained vigorous with 16.1-percent and 11.6-percent increases respectively in the first 11 months. Infrastructure investment gained 3.7 percent, staying flat. Investment in property development rose 9.7 percent, also unchanged.