English
Las bacterias lisogénicas se refieren a bacterias que tienen profagos integrados en sus cromosomas y pueden crecer y reproducirse normalmente sin ser lisadas. Los bacteriófagos suaves se han utilizado ampliamente en los campos de la transducción, los vectores de ingeniería genética y la biología molecular. El frasco de cultivo celular se puede utilizar para comprobar la lisogenicidad de las bacterias. El método de operación específico es el siguiente:
1. Cultivo de bacterias lisogénicas: Inocule E. coli 225 (λ) activado por la pendiente LB en un matraz de cultivo celular de 250 ml que contenga 20 ml de solución de cultivo LB, cultive con agitación a 30 °C durante 16 horas, y luego tome 2 ml de la suspensión bacteriana y conectarlo a otro En un matraz Erlenmeyer de 250ml que contenga 20ml de caldo LB, cultivar con agitación a 37°C durante 2h hasta fase logarítmica.
2. Excluir el fago libre: si la cepa que se va a probar es Bacillus, se puede convertir en una suspensión de esporas y luego tratar a 80 °C durante 10 minutos para matar el fago que puede estar adsorbido y libre en la superficie de la bacteria lisogénica; Si la cepa que se va a analizar no es Bacillus, use antisuero preparado con fagos o una solución de citrato de sodio al 0,2 % para lavar las células de lisógeno en fase logarítmica para eliminar los fagos adsorbidos en la superficie y libres. Después de la centrifugación a 4000r/min durante 10 minutos, se puede agregar el sobrenadante con bacterias indicadoras sensibles para la determinación en placa de doble capa, que se utiliza para probar el fago libre de la muestra y el fago que adsorbe las bacterias lisogénicas. El fago después de la centrifugación Las células son inducidas.
3. Inducción de bacterias lisogénicas: las bacterias recolectadas después de la centrifugación se lavan dos veces con solución salina normal estéril y se convierten en una concentración final de 1011 células/ml con solución salina normal o 100 mmol/l de tampón Tris-HCL (pH 7,0) Para la suspensión bacteriana, agregue 5ml de suspensión bacteriana a cada placa, irradiar con una lámpara UV de 30W a una distancia de 30cm durante 30s, añadir inmediatamente 5ml de solución de cultivo LB de doble concentración, mezclar bien e incubar en la oscuridad a 37°C durante 2h.
4. Inspección de cepas lisogénicas: opere de acuerdo con el método de agar de doble capa, agregue unas gotas de cloroformo al lisado inducido anterior y diluya adecuadamente con el método de dilución de 10 veces. Después de seleccionar las tres diluciones de la dilución, tome 0,3 ml para cada dilución. Mezcle bien con 0,2 ml de suspensión de bacterias E. coli 226 sensibles a la fase logarítmica, luego agregue medio de medio cuerpo LB que se haya derretido y enfriado a 45 °C, mezcle inmediatamente y luego viértalo en la placa de medio sólido LB. Después de la solidificación, 37 Incube a ℃ durante 6 horas y observe. Si aparece una gran cantidad de placas en la placa de cultivo, prueba que la cepa analizada es un lisógeno.
Para verificar si las bacterias tienen lisogenicidad, siga los pasos anteriores. Preste atención a la esterilidad del proceso durante la operación para evitar una operación incorrecta que afecte los resultados de la prueba.
The FAI climbed 5.9 percent year-on-year in the first 11 months of 2018, quickening from the 5.7-percent growth in Jan-Oct, the National Bureau of Statistics (NBS) said Friday in an online statement.
The key indicator of investment, dubbed a major growth driver, hit the bottom in August and has since started to rebound steadily.
In the face of emerging economic challenges home and abroad, China has stepped up efforts to stabilize investment, in particular rolling out measures to motivate private investors and channel funds into infrastructure.
Friday's data showed private investment, accounting for more than 60 percent of the total FAI, expanded by a brisk 8.7 percent.
NBS spokesperson Mao Shengyong said funds into weak economic links registered rapid increases as investment in environmental protection and agriculture jumped 42 percent and 12.5 percent respectively, much faster than the average.
In breakdown, investment in high-tech and equipment manufacturing remained vigorous with 16.1-percent and 11.6-percent increases respectively in the first 11 months. Infrastructure investment gained 3.7 percent, staying flat. Investment in property development rose 9.7 percent, also unchanged.