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La lisis celular es un método experimental importante para cambiar la permeabilidad y la actividad celular. Significa que después de que una célula es infectada por un virus, el virus usa los nutrientes en la célula huésped para sintetizar su propia descendencia, y luego la descendencia del virus destruye la célula huésped y se libera fuera de las células. En los experimentos de lisis celular, frascos de cultivo celular son un consumible común. Los pasos para la lisis celular son los siguientes:
1. Vierta el medio de cultivo y abroche la botella de cultivo celular boca abajo sobre papel absorbente para que el papel absorbente absorba el medio de cultivo (o coloque la botella en posición vertical durante un rato para permitir que el medio de cultivo residual fluya hacia el fondo de la botella y luego use una pipeta para succionarlo).
2. Agregue 3 ml de PBS preenfriado a 4 ℃ (0,01 M pH 7,2 ～7,3) a cada botella de células. Coloque las células planas y agite suavemente durante 1 minuto para lavar las células y luego deseche la solución de lavado. Repita la operación anterior dos veces, lavando las células tres veces para eliminar el líquido de cultivo. Deseche el PBS y coloque el matraz de cultivo en hielo.
3. Añadir 10 ul de PMSF (100 mM) a 1 ml de tampón de lisis, agitar bien y colocar en hielo. (El PMSF debe agitarse hasta que no queden cristales antes de mezclarlo con la solución de lisis).
4. Añadir 400 ul de tampón de lisis que contenga PMSF a cada matraz de células y lisar en hielo durante 30 minutos. Para lisar completamente las células, el matraz debe agitarse con frecuencia.
5. Después de la lisis, use un raspador limpio para raspar las células en un lado del matraz de cultivo (la acción debe ser rápida) y luego use una pistola para mover los restos celulares y el lisado a un tubo de centrífuga de 1,5 ml. (Toda la operación debe realizarse en hielo tanto como sea posible.)
6. Centrifugar a 12000 rpm a 4°C durante 5 min. (Encienda la centrífuga con anticipación para preenfriar)
7. Transfiera el sobrenadante centrifugado a un tubo de centrífuga durante 0,5 min y guárdelo a -20 °C.
Frascos de cultivo celular no solo se utilizan para experimentos de lisis celular, sino también para cultivos de células y tejidos a escala media en el laboratorio, como las células Vero , células HEK 293, células CAR-T, células CHO, células de insectos, etc.
The FAI climbed 5.9 percent year-on-year in the first 11 months of 2018, quickening from the 5.7-percent growth in Jan-Oct, the National Bureau of Statistics (NBS) said Friday in an online statement.
The key indicator of investment, dubbed a major growth driver, hit the bottom in August and has since started to rebound steadily.
In the face of emerging economic challenges home and abroad, China has stepped up efforts to stabilize investment, in particular rolling out measures to motivate private investors and channel funds into infrastructure.
Friday's data showed private investment, accounting for more than 60 percent of the total FAI, expanded by a brisk 8.7 percent.
NBS spokesperson Mao Shengyong said funds into weak economic links registered rapid increases as investment in environmental protection and agriculture jumped 42 percent and 12.5 percent respectively, much faster than the average.
In breakdown, investment in high-tech and equipment manufacturing remained vigorous with 16.1-percent and 11.6-percent increases respectively in the first 11 months. Infrastructure investment gained 3.7 percent, staying flat. Investment in property development rose 9.7 percent, also unchanged.