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Materialien und Methoden
3.1. Schüttelkolbenkulturen
Vorkulturen von MDCK.SUS2-Suspensionszellen wurden in Schüttelkolben (125-ml-Polycarbonat-Erlenmeyerkolben, #431143, Corning®, New York City, NY, USA) mit 50 ml Arbeitsvolumen (wv) gezüchtet , in einem Multitron Pro Inkubator (Infors HT, Bottmingen, Schweiz) bei 37 °C und 5 % CO2-Atmosphäre mit einer Schüttelfrequenz von 180 U/min. Die Zellen wurden alle 3–4 Tage mit einer Aussaatdichte von 0,5–0,8 × 106 Zellen/ml passagiert.
IAV A/Puerto Rico/8/34 (H1N1)-Aussaatvirus wurde zur Infektion verwendet, erzeugt in adhärenten MDCK-Zellen (ECACC # 84121903). Das Saatvirus hatte einen Titer von 1,1 × 109 TCID50/mL.
Zellen wurden in einem chemisch definierten, proteinfreien und tierischen Komponenten-freien Medium, Smif8 (Smif8 PGD 2×, ergänzt mit 5 mM Glutamin, und 8 kultiviert mM Pyruvat), speziell entwickelt für die Kultivierung von Suspensions-MDCK-Zellen [95].
Wachstums- und Infektionsexperimente zur Modellvalidierung wurden unter Verwendung von 500-ml-Schüttelkolben (#4113-0500, Nalgene™, Thermo Scientific, Waltham, MA, USA) mit einem anfänglichen Kultivierungsvolumen von 200 ml bei 150 U/min. Es wurden zwei Kultivierungen durchgeführt, eine Scheininfektion (Kultivierung 1), bei der die Zellen etwa 200 h wuchsen, und eine Infektion (Kultivierung 2), bei der die Zellen etwa 49 h nach der Inokulation mit IAV infiziert wurden. Um eine synchrone Infektion der Zellpopulation zu erreichen, wurde ein moi = 10 verwendet. Aufgrund der relativ niedrigen Zellkonzentration zum Zeitpunkt der Infektion (2,1 × 10 6 Zellen/ml) und der verwendeten hohen moi war weder ein Mediumwechsel noch eine Trypsinzugabe (zur Virusaktivierung) erforderlich. Bei beiden Kultivierungen wurde vor der Probenahme steriles Milli-Q-Wasser hinzugefügt, um die Wasserverdunstung (1–2 ml/Tag) auszugleichen, da das Experiment in einem nicht hydrierten Inkubator durchgeführt wurde.
Quelle von: https:/ /www.mdpi.com/2218-1989/12/3/239/htm
The FAI climbed 5.9 percent year-on-year in the first 11 months of 2018, quickening from the 5.7-percent growth in Jan-Oct, the National Bureau of Statistics (NBS) said Friday in an online statement.
The key indicator of investment, dubbed a major growth driver, hit the bottom in August and has since started to rebound steadily.
In the face of emerging economic challenges home and abroad, China has stepped up efforts to stabilize investment, in particular rolling out measures to motivate private investors and channel funds into infrastructure.
Friday's data showed private investment, accounting for more than 60 percent of the total FAI, expanded by a brisk 8.7 percent.
NBS spokesperson Mao Shengyong said funds into weak economic links registered rapid increases as investment in environmental protection and agriculture jumped 42 percent and 12.5 percent respectively, much faster than the average.
In breakdown, investment in high-tech and equipment manufacturing remained vigorous with 16.1-percent and 11.6-percent increases respectively in the first 11 months. Infrastructure investment gained 3.7 percent, staying flat. Investment in property development rose 9.7 percent, also unchanged.