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Lysogene Bakterien beziehen sich auf Bakterien, die Prophagen auf ihren Chromosomen integriert haben und normal wachsen und sich vermehren können, ohne lysiert zu werden. Milde Bakteriophagen wurden in großem Umfang auf den Gebieten der Transduktion, gentechnischer Vektoren und der Molekularbiologie verwendet. Das Zellkulturflasche kann verwendet werden, um die Lysogenität von Bakterien zu überprüfen. Die spezifische Betriebsmethode ist wie folgt:
1. Kultur lysogener Bakterien: Inokulieren Sie E. coli 225 (λ), aktiviert durch die LB-Steigung, in eine 250-ml-Zellkulturflasche mit 20 ml LB-Kulturlösung, kultivieren Sie sie unter Schütteln bei 30 °C für 16 Stunden und nehmen Sie dann 2 ml Bakteriensuspension daraus und Verbinden Sie es mit einem anderen. In einem 250-ml-Erlenmeyerkolben, der 20 ml LB-Brühe enthält, kultivieren Sie unter Schütteln bei 37°C für 2 h bis zur logarithmischen Phase.
2. Freie Phagen ausschließen: Wenn der zu testende Stamm Bacillus ist, kann er zu einer Sporensuspension verarbeitet und dann 10 Minuten lang bei 80°C behandelt werden, um die Phagen abzutöten, die auf der Oberfläche der lysogenen Bakterien adsorbiert und frei sein können; wenn der zu testende Stamm kein Bacillus ist, verwenden Sie Antiserum, das durch Phagen oder 0,2 % Natriumcitratlösung hergestellt wurde, um Lysogenzellen in der Log-Phase zu waschen, um oberflächenadsorbierte und freie Phagen zu entfernen. Nach 10-minütiger Zentrifugation bei 4000 U/min kann der Überstand mit empfindlichen Indikatorbakterien für die Doppelschichtplattenbestimmung versetzt werden, die verwendet wird, um den freien Phagen der Probe und den Phagen zu testen, der die lysogenen Bakterien adsorbiert. Der Phage nach der Zentrifugation Die Zellen werden induziert.
3. Induktion lysogener Bakterien: Die nach der Zentrifugation gesammelten Bakterien werden zweimal mit steriler physiologischer Kochsalzlösung gewaschen und mit physiologischer Kochsalzlösung oder 100 mmol/l Tris-HCL-Puffer (pH 7,0) auf eine Endkonzentration von 1011 Zellen/ml gebracht 5 ml Bakteriensuspension auf jede Schale geben, mit einer 30-W-UV-Lampe in einem Abstand von 30 cm für 30 Sekunden bestrahlen, sofort 5 ml doppelt konzentrierte LB-Kulturlösung zugeben, gut mischen und im Dunkeln bei 37 °C für 2 Stunden inkubieren.
4. Untersuchung lysogener Stämme: Arbeiten Sie nach der Doppelschicht-Agar-Methode, fügen Sie dem oben induzierten Lysat einige Tropfen Chloroform hinzu und verdünnen Sie entsprechend mit der 10-fachen Verdünnungsmethode. Nachdem Sie die drei Verdünnungen der Verdünnung ausgewählt haben, nehmen Sie 0,3 ml für jede Verdünnung. Mit 0,2 ml logarithmischer phasenempfindlicher E. coli 226-Bakteriensuspension gut mischen, dann geschmolzenes und auf 45 °C abgekühltes LB-Halbkörpermedium zugeben, sofort mischen und dann auf die LB-Platte mit festem Medium gießen. Nach der Verfestigung 37 bei ℃ für 6 h inkubieren und beobachten. Wenn eine große Anzahl von Plaques auf der Kulturplatte erscheint, beweist dies, dass der getestete Stamm ein Lysogen ist.
Um zu überprüfen, ob die Bakterien Lysogenität aufweisen, befolgen Sie die obigen Schritte. Achten Sie während des Betriebs auf die Sterilität des Prozesses, um unsachgemäßen Betrieb zu vermeiden, der die Testergebnisse beeinflusst.
The FAI climbed 5.9 percent year-on-year in the first 11 months of 2018, quickening from the 5.7-percent growth in Jan-Oct, the National Bureau of Statistics (NBS) said Friday in an online statement.
The key indicator of investment, dubbed a major growth driver, hit the bottom in August and has since started to rebound steadily.
In the face of emerging economic challenges home and abroad, China has stepped up efforts to stabilize investment, in particular rolling out measures to motivate private investors and channel funds into infrastructure.
Friday's data showed private investment, accounting for more than 60 percent of the total FAI, expanded by a brisk 8.7 percent.
NBS spokesperson Mao Shengyong said funds into weak economic links registered rapid increases as investment in environmental protection and agriculture jumped 42 percent and 12.5 percent respectively, much faster than the average.
In breakdown, investment in high-tech and equipment manufacturing remained vigorous with 16.1-percent and 11.6-percent increases respectively in the first 11 months. Infrastructure investment gained 3.7 percent, staying flat. Investment in property development rose 9.7 percent, also unchanged.