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Die Zelllyse ist eine wichtige experimentelle Methode, um die Zellpermeabilität und -aktivität zu verändern. Das heißt, nachdem eine Zelle mit einem Virus infiziert wurde, verwendet das Virus die Nährstoffe in der Wirtszelle, um seine eigenen Nachkommen zu synthetisieren, und dann zerstört der Virusnachkomme die Wirtszelle und wird aus den Zellen freigesetzt. Bei Zelllyse-Experimenten sind Zellkulturflaschen ein übliches Verbrauchsmaterial. Die Schritte für die Zelllyse sind wie folgt:
1. Gießen Sie das Kulturmedium aus und schnallen Sie die Zellkulturflasche kopfüber auf saugfähiges Papier, damit das saugfähige Papier das Kulturmedium aufnimmt (oder stellen Sie die Flasche eine Weile aufrecht, damit das restliche Kulturmedium auf den Boden der Flasche fließen kann). und dann mit einer Pipette absaugen ).
2. Geben Sie 3 ml 4℃ vorgekühltes PBS (0,01 M pH7,2～7,3) in jede Flasche mit Zellen. Legen Sie die Zellen flach und schütteln Sie sie 1 Minute lang vorsichtig, um die Zellen zu waschen, und entsorgen Sie dann die Waschlösung. Wiederholen Sie den obigen Vorgang zweimal und waschen Sie die Zellen dreimal, um die Kulturflüssigkeit wegzuspülen. Entsorgen Sie das PBS und stellen Sie die Kulturflasche auf Eis.
3. 10 ul PMSF (100 mM) zu 1 ml Lysepuffer geben, gut schütteln und auf Eis stellen. (PMSF muss vor dem Mischen mit der Lyselösung geschüttelt werden, bis keine Kristalle mehr vorhanden sind.)
4. Füge 400 ul Lysepuffer, der PMSF enthält, zu jedem Kolben mit Zellen hinzu und lysiere auf Eis für 30 Minuten. Um die Zellen vollständig zu lysieren, muss der Kolben häufig geschüttelt werden.
5. Verwenden Sie nach der Lyse einen sauberen Schaber, um die Zellen auf einer Seite des Kulturkolbens abzukratzen (die Wirkung sollte schnell sein), und verwenden Sie dann eine Pistole, um die Zelltrümmer zu bewegen und in ein 1,5-ml-Zentrifugenröhrchen zu lysieren. (Die gesamte Operation sollte so weit wie möglich auf Eis durchgeführt werden.)
6. Zentrifugieren Sie bei 12000 U/min bei 4°C für 5 min. (Zentrifuge vorab zum Vorkühlen einschalten)
7. Überführen Sie den zentrifugierten Überstand für 0,5 min in ein Zentrifugenröhrchen und lagern Sie es bei -20 °C.
Zellkulturflaschen werden nicht nur für Zelllyseexperimente verwendet, sondern auch für mittlere Zell- und Gewebekulturen im Labor, wie z. B. Vero-Zellen , HEK 293-Zellen, CAR-T-Zellen, CHO-Zellen, Insektenzellen usw.
The FAI climbed 5.9 percent year-on-year in the first 11 months of 2018, quickening from the 5.7-percent growth in Jan-Oct, the National Bureau of Statistics (NBS) said Friday in an online statement.
The key indicator of investment, dubbed a major growth driver, hit the bottom in August and has since started to rebound steadily.
In the face of emerging economic challenges home and abroad, China has stepped up efforts to stabilize investment, in particular rolling out measures to motivate private investors and channel funds into infrastructure.
Friday's data showed private investment, accounting for more than 60 percent of the total FAI, expanded by a brisk 8.7 percent.
NBS spokesperson Mao Shengyong said funds into weak economic links registered rapid increases as investment in environmental protection and agriculture jumped 42 percent and 12.5 percent respectively, much faster than the average.
In breakdown, investment in high-tech and equipment manufacturing remained vigorous with 16.1-percent and 11.6-percent increases respectively in the first 11 months. Infrastructure investment gained 3.7 percent, staying flat. Investment in property development rose 9.7 percent, also unchanged.