English
Mae lysis celloedd yn ddull arbrofol pwysig o newid athreiddedd a gweithgaredd celloedd. Mae'n golygu, ar ôl i gell gael ei heintio gan firws, bod y firws yn defnyddio'r maetholion yn y gell letyol i syntheseiddio ei epil ei hun, ac yna mae'r epil firws yn dinistrio'r gell letyol ac yn cael ei ryddhau allan o gelloedd. Mewn arbrofion cell lysis, mae fflasgiau diwylliant cell yn ddefnydd traul cyffredin. Mae'r camau ar gyfer lysis celloedd fel a ganlyn:
1. Arllwyswch y cyfrwng diwylliant, a bwclwch y botel diwylliant celloedd wyneb i waered ar bapur amsugnol fel y bydd y papur amsugnol yn amsugno'r cyfrwng diwylliant (neu rhowch y botel yn unionsyth am ychydig i ganiatáu i'r cyfrwng diwylliant gweddilliol lifo i waelod y botel ac yna defnyddio pibed i'w sugno i ffwrdd ).
2. Ychwanegu 3ml o PBS 4 ℃ wedi'i oeri ymlaen llaw (0.01M pH7.2～7.3) i bob potel o gelloedd. Gosodwch y celloedd yn fflat a'u hysgwyd yn ysgafn am 1 munud i olchi'r celloedd, ac yna taflu'r toddiant golchi. Ailadroddwch y llawdriniaeth uchod ddwywaith, gan olchi'r celloedd dair gwaith i olchi'r hylif meithrin i ffwrdd. Taflwch y PBS a rhowch y fflasg feithrin ar iâ.
3. Ychwanegu 10ul PMSF (100mM) i glustog lysis 1ml, ysgwyd yn dda a'i roi ar rew. (Rhaid ysgwyd PMSF nes nad oes crisialau cyn ei gymysgu â'r hydoddiant lysis.)
4. Ychwanegu 400ul o byffer lysis sy'n cynnwys PMSF at bob fflasg o gelloedd, a'i lysio ar rew am 30 munud. Er mwyn lyse'r celloedd yn llawn, rhaid ysgwyd y fflasg yn aml.
5. Ar ôl lysis, defnyddiwch sgrafell glân i grafu'r celloedd ar un ochr i'r fflasg diwylliant (dylai'r weithred fod yn gyflym), ac yna defnyddiwch gwn i symud y malurion cell a'r lysate i diwb centrifuge 1.5ml. (Dylid gwneud y llawdriniaeth gyfan ar rew cymaint â phosib.)
6. Centrifuge ar 12000 rpm ar 4 ° C am 5 munud. (Trowch y centrifuge ymlaen ymlaen llaw i cyn-oeri)
7. Trosglwyddwch y supernatant centrifuge i mewn i tiwb centrifuge am 0.5 munud a'i storio ar -20 ° C. , celloedd HEK 293, celloedd CAR-T, celloedd CHO, celloedd pryfed, etc.
Cell culture flasksCell fflasgiau diwylliant
The FAI climbed 5.9 percent year-on-year in the first 11 months of 2018, quickening from the 5.7-percent growth in Jan-Oct, the National Bureau of Statistics (NBS) said Friday in an online statement.
The key indicator of investment, dubbed a major growth driver, hit the bottom in August and has since started to rebound steadily.
In the face of emerging economic challenges home and abroad, China has stepped up efforts to stabilize investment, in particular rolling out measures to motivate private investors and channel funds into infrastructure.
Friday's data showed private investment, accounting for more than 60 percent of the total FAI, expanded by a brisk 8.7 percent.
NBS spokesperson Mao Shengyong said funds into weak economic links registered rapid increases as investment in environmental protection and agriculture jumped 42 percent and 12.5 percent respectively, much faster than the average.
In breakdown, investment in high-tech and equipment manufacturing remained vigorous with 16.1-percent and 11.6-percent increases respectively in the first 11 months. Infrastructure investment gained 3.7 percent, staying flat. Investment in property development rose 9.7 percent, also unchanged.