English
Лизогенные бактэрыі адносяцца да бактэрый, якія маюць профаги, інтэграваныя ў іх храмасомы, і якія могуць нармальна расці і размнажацца без лізу. Мяккія бактэрыяфагі шырока выкарыстоўваюцца ў галіне трансдукции, геннай інжынерыі вектараў і малекулярнай біялогіі. колба для культуры клетак можна выкарыстоўваць для праверкі лизогенности бактэрый. Спецыфічны метад працы наступны:
1. Культура лизогенных бактэрый: пасейце E. coli 225 (λ), актываваную нахілам LB, у колбу для культуры клетак ёмістасцю 250 мл, якая змяшчае 20 мл раствора культуры LB, культуру з устрэсваннем пры 30 °C на працягу 16 гадзін, а затым вазьміце з яе 2 мл бактэрыяльнай завісі і злучыць яго з іншым. У колбу Эрленмейера аб'ёмам 250 мл, якая змяшчае 20 мл булёна LB, культуру пры ўстрэсванні пры 37°С на працягу 2 гадзін да лагарыфмічнай фазы.
2. Выключыць свабодны фаг: калі штам, які падлягае тэсціраванню, з'яўляецца Bacillus, яго можна зрабіць у завісі спрэчка, а затым апрацаваць пры тэмпературы 80°C на працягу 10 хвілін, каб знішчыць фаг, які можа адсарбавацца і вызваліцца на паверхні лизогенных бактэрый; калі даследуемы штам не з'яўляецца Bacillus, выкарыстоўвайце антысыворотку, прыгатаваную з дапамогай фага або 0,2% раствора цытрата натрыю, каб прамыць клеткі лізагену log-фазы, каб выдаліць адсарбаваны на паверхні і свабодны фаг. Пасля цэнтрыфугавання пры 4000 аб/мін на працягу 10 хвілін у супернатант можна дадаць адчувальныя індыкатарныя бактэрыі для вызначэння двухслаёвай пласцінкі, якая выкарыстоўваецца для тэставання вольнага фага ў пробы і фага, які адсарбуе лизогенные бактэрыі. Фаг пасля цэнтрыфугавання. Клеткі індукуюць.
3. Індукцыя лизогенных бактэрый: бактэрыі, сабраныя пасля цэнтрыфугавання, промывают двойчы стэрыльным нармальным фізіялагічным растворам і даводзяць да канчатковай канцэнтрацыі 1011 клетак/мл нармальным фізіялагічным растворам або 100 ммоль/л буфера Tris-HCL (pH7,0) Для бактэрыяльнай завісі дадайце 5 мл бактэрыяльнай завісі на кожную страву, апрамяняйце УФ-лямпай магутнасцю 30 Вт на адлегласці 30 см на працягу 30 секунд, неадкладна дадайце 5 мл двайнога канцэнтраванага раствора культуры LB, добра змяшайце і вытрымлівайце ў цемры пры 37°C на працягу 2 гадзін.
4. Праверка лизогенных штамаў: Працуйце ў адпаведнасці з метадам двухслаёвага агару, дадайце некалькі кропель хлараформу ў вышэйзгаданы індукаваны лізат і развядзіце адпаведным чынам метадам 10-кратнага развядзення. Пасля выбару трох развядзенняў прымайце па 0,3 мл для кожнага развядзення. Добра змяшайце з 0,2 мл лагарыфмічнай фазаадчувальнай завісі бактэрый E. coli 226, затым дадайце сераду LB, расплапленую і астуджаную да 45°C, неадкладна змяшайце, а затым выліце яе на пласціну з цвёрдым асяроддзем LB. Пасля застывання 37 Інкубаваць пры ℃ на працягу 6 гадзін і назіраць. Калі на культывальнай пласцінцы з'яўляецца вялікая колькасць бляшак, гэта сведчыць аб тым, што даследаваны штам з'яўляецца лізагенам.
Каб праверыць, ці ёсць у бактэрый лізагеннасць, выканайце прыведзеныя вышэй дзеянні. Звяртайце ўвагу на стэрыльнасць працэсу падчас працы, каб пазбегнуць няправільнай эксплуатацыі, якая ўплывае на вынікі аналізаў.
The FAI climbed 5.9 percent year-on-year in the first 11 months of 2018, quickening from the 5.7-percent growth in Jan-Oct, the National Bureau of Statistics (NBS) said Friday in an online statement.
The key indicator of investment, dubbed a major growth driver, hit the bottom in August and has since started to rebound steadily.
In the face of emerging economic challenges home and abroad, China has stepped up efforts to stabilize investment, in particular rolling out measures to motivate private investors and channel funds into infrastructure.
Friday's data showed private investment, accounting for more than 60 percent of the total FAI, expanded by a brisk 8.7 percent.
NBS spokesperson Mao Shengyong said funds into weak economic links registered rapid increases as investment in environmental protection and agriculture jumped 42 percent and 12.5 percent respectively, much faster than the average.
In breakdown, investment in high-tech and equipment manufacturing remained vigorous with 16.1-percent and 11.6-percent increases respectively in the first 11 months. Infrastructure investment gained 3.7 percent, staying flat. Investment in property development rose 9.7 percent, also unchanged.