English
المواد والطرق
3.1. زراعة قوارير الهز
تم زراعة ما قبل زراعة الخلايا المعلقة MDCK.SUS2 في شاكر قوارير (125 مل قوارير Erlenmeyer من البولي كربونات ، # 431143 ، Corning® ، مدينة نيويورك ، نيويورك ، الولايات المتحدة الأمريكية) مع حجم عمل 50 مل (wv) ، في حاضنة Multitron Pro (Infors HT ، Bottmingen ، سويسرا) عند 37 درجة مئوية و 5٪ من ثاني أكسيد الكربون مع تردد اهتزاز يبلغ 180 دورة في الدقيقة. تم تمرير الخلايا كل 3-4 أيام بكثافة بذر 0.5-0.8 × 106 خلية / مل.
تم استخدام فيروس البذور IAV A / Puerto Rico / 8/34 (H1N1) للعدوى ، ولدت في خلايا MDCK الملتصقة (ECACC # 84121903). كان لفيروس البذور عيار 1.1 × 109 TCID50 / mL.
تمت زراعة الخلايا في وسط محدد كيميائيًا وخالي من البروتين وخالي من المكونات الحيوانية ، Smif8 (Smif8 PGD 2 × ، مكمل بـ 5 ملي مولار من الجلوتامين ، و 8 mM pyruvate) ، الذي تم تطويره خصيصًا لزراعة خلايا MDCK المعلقة [95]. تم إجراء تجارب النمو والعدوى للتحقق من صحة النموذج باستخدام قوارير اهتزاز سعة 500 مل (# 4113-0500 ، Nalgene ™ ، Thermo Scientific ، Waltham ، MA ، الولايات المتحدة الأمريكية) بحجم زراعة أولي 200 مل عند 150 دورة في الدقيقة. تم إجراء زراعتين ، واحدة عدوى وهمية (زراعة 1) ، حيث نمت الخلايا لحوالي 200 ساعة ، وعدوى واحدة (زراعة 2) ، حيث أصيبت الخلايا بـ IAV في حوالي 49 ساعة بعد التلقيح. لتحقيق عدوى متزامنة لسكان الخلية ، تم استخدام moi = 10. نظرًا للتركيز المنخفض نسبيًا للخلايا في وقت الإصابة (2.1 × 10 خلية / مل) وارتفاع نسبة Moi المستخدمة ، لم يكن من الضروري استبدال الوسيط أو إضافة التربسين (لتنشيط الفيروس). في كلتا الزراعة ، تمت إضافة ماء Milli-Q العقيم قبل أخذ العينات للتعويض عن تبخر الماء (1-2 مل / يوم) منذ أن أجريت التجربة في حاضنة غير رطبة.
المصدر من:
https: / /www.mdpi.com/2218-1989/12/3/239/htmhttps://www.mdpi.com/2218-1989/12/3/239/htm
The FAI climbed 5.9 percent year-on-year in the first 11 months of 2018, quickening from the 5.7-percent growth in Jan-Oct, the National Bureau of Statistics (NBS) said Friday in an online statement.
The key indicator of investment, dubbed a major growth driver, hit the bottom in August and has since started to rebound steadily.
In the face of emerging economic challenges home and abroad, China has stepped up efforts to stabilize investment, in particular rolling out measures to motivate private investors and channel funds into infrastructure.
Friday's data showed private investment, accounting for more than 60 percent of the total FAI, expanded by a brisk 8.7 percent.
NBS spokesperson Mao Shengyong said funds into weak economic links registered rapid increases as investment in environmental protection and agriculture jumped 42 percent and 12.5 percent respectively, much faster than the average.
In breakdown, investment in high-tech and equipment manufacturing remained vigorous with 16.1-percent and 11.6-percent increases respectively in the first 11 months. Infrastructure investment gained 3.7 percent, staying flat. Investment in property development rose 9.7 percent, also unchanged.