تطبيق قوارير زراعة الخلايا في فحص البكتيريا اللايسوجينية

تشير البكتيريا اللايسوجينية إلى البكتيريا التي تحتوي على نفاثات مدمجة في كروموسوماتها ويمكن أن تنمو وتتكاثر بشكل طبيعي دون أن تتعرض للتحلل. تم استخدام العاثيات الخفيفة على نطاق واسع في مجالات النقل ، وناقلات الهندسة الوراثية ، والبيولوجيا الجزيئية. يمكن استخدام قارورة ثقافة الخلية للتحقق من استسالة البكتيريا. طريقة التشغيل المحددة هي كما يلي:

1. ثقافة البكتيريا اللايسوجينية: لقح الإشريكية القولونية 225 (λ) التي يتم تنشيطها بواسطة منحدر LB في دورق استنبات خلوي سعة 250 مل يحتوي على 20 مل من محلول استنبات LB ، وزرعها مع الاهتزاز عند 30 درجة مئوية لمدة 16 ساعة ، ثم خذ 2 مل من المعلق البكتيري منها و قم بتوصيله بآخر في دورق مخروطي سعة 250 مل يحتوي على 20 مل من مرق LB ، قم بالثقافة مع الرج عند 37 درجة مئوية لمدة ساعتين إلى المرحلة اللوغاريتمية.

2. استبعاد العاثية الحرة: إذا كانت السلالة المراد اختبارها هي العصوية ، فيمكن تحويلها إلى معلق بوغ ، ثم معالجتها عند 80 درجة مئوية لمدة 10 دقائق لقتل العاثية التي قد تمتص وتتحرر على سطح البكتيريا اللايسوجينية ؛ إذا كانت السلالة المراد اختبارها غير عصوية ، استخدم المصل المضاد المحضر بواسطة الملتهمة أو محلول سيترات الصوديوم 0.2٪ لغسل خلايا اللايسوجين في طور التسجيل لإزالة الملتهمة السطحية والممتصة. بعد الطرد المركزي بسرعة 4000 لفة / دقيقة لمدة 10 دقائق ، يمكن إضافة المادة الطافية مع بكتيريا مؤشر حساسة لتحديد اللوحة ذات الطبقة المزدوجة ، والتي تُستخدم لاختبار الملتهمة الحرة للعينة والعاثية التي تمتص البكتيريا اللايسوجينية. اللاقمات بعد الطرد المركزي يتم إحداث الخلايا.

3. تحريض البكتيريا اللايسوجينية: يتم غسل البكتيريا التي تم جمعها بعد الطرد المركزي مرتين بمحلول ملحي معقم ، وتحويلها إلى تركيز نهائي من 1011 خلية / مل بمحلول ملحي عادي أو 100 مليمول / لتر عازلة Tris-HCL (pH7.0) للتعليق البكتيري ، أضف 5 مل من المعلق البكتيري لكل طبق ، قم بالإشعاع بمصباح UV 30W على مسافة 30 سم لمدة 30 ثانية ، أضف على الفور 5 مل من محلول ثقافة LB مزدوج التركيز ، واخلطه جيدًا واحتضنه في الظلام عند 37 درجة مئوية لمدة ساعتين.

4. فحص السلالات اللايسوجينية: تعمل وفقًا لطريقة أجار مزدوجة الطبقة ، أضف بضع قطرات من الكلوروفورم إلى المحللة المستحثة أعلاه ، وقم بالتخفيف بشكل مناسب باستخدام طريقة التخفيف 10 أضعاف. بعد اختيار التخفيفات الثلاثة للتخفيف ، خذ 0.3 مل لكل تخفيف. اخلط جيدًا مع 0.2 مل من تعليق البكتيريا E. coli 226 الحساسة للطور اللوغاريتمي ، ثم أضف وسط نصف الجسم LB الذي تم صهره وتبريده إلى 45 درجة مئوية ، واخلطه على الفور ، ثم صبه على اللوحة المتوسطة الصلبة LB. بعد التصلب ، احتضان 37 في ℃ لمدة 6 ساعات وراقب. إذا ظهر عدد كبير من اللويحات على الصفيحة المزروعة ، فهذا يثبت أن السلالة المختبرة هي ليسوجين. انتبه إلى عقم العملية أثناء العملية لتجنب التشغيل غير السليم الذي يؤثر على نتائج الاختبار.

To check whether the bacteria have lysogenicity, follow the above steps. Pay attention to the sterility of the process during operation to avoid improper operation that affects the test results.

The FAI climbed 5.9 percent year-on-year in the first 11 months of 2018, quickening from the 5.7-percent growth in Jan-Oct, the National Bureau of Statistics (NBS) said Friday in an online statement.

The key indicator of investment, dubbed a major growth driver, hit the bottom in August and has since started to rebound steadily.

In the face of emerging economic challenges home and abroad, China has stepped up efforts to stabilize investment, in particular rolling out measures to motivate private investors and channel funds into infrastructure.

Friday's data showed private investment, accounting for more than 60 percent of the total FAI, expanded by a brisk 8.7 percent.

NBS spokesperson Mao Shengyong said funds into weak economic links registered rapid increases as investment in environmental protection and agriculture jumped 42 percent and 12.5 percent respectively, much faster than the average.

In breakdown, investment in high-tech and equipment manufacturing remained vigorous with 16.1-percent and 11.6-percent increases respectively in the first 11 months. Infrastructure investment gained 3.7 percent, staying flat. Investment in property development rose 9.7 percent, also unchanged.